[发明专利]一种检测miRNA的方法及试剂盒

权利要求书

1.一种检测miRNA的方法，其特征在于，其包括以下步骤：

S1：提供特异性识别miRNA的DNA分子机器，所述DNA分子机器为包含G-四链体序列的互补序列的一条核苷酸序列；

S2：将所述DNA分子机器与待测样品混合；

S3：引入DNA聚合酶和切口酶，作用于DNA分子机器，发生DNA新链合成、形成单链切口、不断剥离产生富G序列片段的系列反应；

S4：引入硫黄素T，诱导富G序列片段产生G-四链体结构并与G-四链体结合，产生荧光；

S5：记录荧光发光情况。

2.如权利要求1所述的检测miRNA的方法，其特征在于：所述的DNA分子机器从5’端到3’端依次是G-四链体合成模板、切口酶识别区、稳定区和靶序列互补区。

3.如权利要求2所述的检测miRNA的方法，其特征在于：所述靶序列互补区与miRNA序列3’末端互补；所述的切口酶识别区为切口酶能够识别序列的互补序列；所述的G-四链体合成模板位于核苷酸序列的5’末端，且G-四链体合成模板为G-四链体序列的互补序列。

4.如权利要求1所述的检测miRNA的方法，其特征在于：所述S3中，加入dNTP和缓冲液，并置于恒温条件下扩增；所述S4中，加入金属阳离子参与反应。

5.如权利要求4所述的检测miRNA的方法，其特征在于：所述恒温的温度为45-65℃，扩增时间为15-30min。

6.如权利要求1所述的检测miRNA的方法，其特征在于：所述S5中，每隔30s读取一次荧光并记录；所述记录方式为，对比溶液的颜色深浅的书面描述、拍照、录像或者测定吸收光谱。

7.如权利要求1所述的检测miRNA的方法，其特征在于：所述G-四链体合成模板序列包括5’-…CCCCAAAACCCCAAAACCCCAAAACCCC…-3’。

8.如权利要求2所述的检测miRNA的方法，其特征在于：所述靶序列互补区的碱基数为10-30bp。

9.如权利要求2所述的检测miRNA的方法，其特征在于：所述切口酶识别区的序列包括5’-GACTC-3’。

10.一种检测miRNA的试剂盒，其特征在于：包括试剂一、试剂二、试剂三、试剂四和试剂五，所述试剂一为DNA分子机器溶液，所述试剂二为切口酶溶液，所述试剂三为聚合酶溶液，所述试剂四为硫黄素T溶液，所述试剂五为缓冲液、dNTP和金属离子的混合溶液。