[发明专利]一种DNA分子机器及核酸检测方法

说明书

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种DNA分子机器，其为一条核苷酸序列，包括以下区域：靶序列识别区、稳定区、切口酶识别区和G‑四链体合成模板。所述靶序列识别区、稳定区、切口酶识别区和G‑四链体合成模板从核苷酸序列的3’端到5’端依次排列。本发明用于将样品中的核酸信号转化为G‑四链体，在常温下可实现G‑四链体的不断扩增，将核酸的信号高度放大，实现高灵敏度的核酸快速定性和半定量分析测定。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种DNA分子机器及核酸检测方法。

背景技术

核酸等温扩增技术就是其中一类新的核酸扩增技术，它无需像PCR那样经过变性、退火和延伸三个阶段的温度变化，只需在单一恒定温度下即可快速稳定的实现核酸的扩增。此外，等温扩增技术需要的条件非常简单，摆脱了对精良仪器设备的依赖，在水浴下即可进行，甚至在细胞表面上或在活细胞内。鉴于等温检测技术的这些优势，一系列的核酸等温扩增技术被开发与研究，不断成熟，完成了从实验室到实际应用的过渡，逐步在医学、法学和分子生物学等领域得到广泛应用。

尽管恒温扩增技术以其恒温优势以及扩增效率高的特点得到广

泛重视，但恒温扩增产物的检测未能突破荧光染料嵌入进行实时分析或凝胶电泳进行终点分析等传统的核酸扩增检测方法，真正意义上实现快速、简单、便携地检测核酸。

传统的荧光标记核酸扩增检测技术，需要进行荧光探针标记，操作繁琐，费时又昂贵并且其灵敏度不高。依托传统技术构建的荧光传感器虽然背景信号低，稳定性强，然而，由于实际样本成分复杂，靶标DNA含量极低，这就要求检测方法具有极高的灵敏度和特异性，常规的荧光标记核酸扩增检测技术的灵敏度和选择性无法满足其检测需求。

发明内容

(一)要解决的技术问题

为了解决现有技术的上述问题，本发明提供一种DNA分子机器及核酸检测方法。G-四链体生成机器识别靶序列，并在靶序列的牵引之下扩大生成G-四链体，与硫磺素结合产生稳定的荧光，从而将靶序列信号扩大，达到定性的效果。无需荧光探针标记，灵敏度更高，操作更简单。

(二)技术方案

为了达到上述目的，本发明采用的主要技术方案包括：

一种DNA分子机器，其为一条核苷酸序列，包括以下区域：靶序列识别区、稳定区、切口酶识别区和G-四链体合成模板。

本发明优选的技术方案中，所述靶序列识别区、稳定区、切口酶识别区和G-四链体合成模板从核苷酸序列的3’端到5’端依次排列。

本发明优选的技术方案中，所述靶序列识别区位于核苷酸序列的3’末端，且与靶分子序列3’末端互补；所述的切口酶识别区为切口酶能够识别序列的互补序列；所述的G-四链体合成模板位于核苷酸序列的5’末端，G-四链体合成模板的序列为G-四链体互补序列。

本发明优选的技术方案中，所述G-四链体合成模板的序列包括

5’-ATGGGGATGGGGATGGGGATGGG-3’或5’-…CCCCAAAACCCCAAAACCCCAAAACCCC…-3。

本发明优选的技术方案中，所述靶序列识别区序列的碱基数为10-50bp，优选为10-30bp，更优选为12bp。

本发明的DNA分子机器，所述切口酶识别区的序列包括5’-…GACTC…-3’，所述切口酶来源于重组大肠杆菌菌株；所述稳定区的序列包括5’-TGCATC-3’或5’-TTTTTT-3’。

本发明提供一种核酸检测方法，包括以下步骤，

S1：将上述的DNA分子机器与待测靶序列混合；