[发明专利]嵌合抗原受体及其用途和制备方法

说明书

本发明涉及一种新型嵌合抗原受体(CAR)及其用途和制备方法、包含该嵌合抗原受体的T细胞、编码该嵌合抗原受体的核酸序列、以及包含该核酸序列的载体，以及包含该载体或T细胞的药物组合物。

技术领域

本发明涉及一种新型嵌合抗原受体(CAR)及其用途和制备方法。该嵌合抗原受体可以与免疫抑制性受体PD-1的配体PD-L1和/或PD-L2以及CD19抗原特异性结合；表达该嵌合抗原受体的T细胞(CAR-T细胞)可以特异性的杀伤表达PD-L1和/或PD-L2配体以及CD19抗原的靶细胞。

背景技术

人体免疫系统对T细胞功能的调节包括正向激活通路和负向抑制通路。在正向激活通路中，对T细胞的激活需要两种信号，包括第一信号和第二信号。第一信号由抗原呈递细胞(APC)膜表面的主要组织相容性复合体(MHC)-多肽的复合物与T细胞膜表面的T细胞受体(TCR)结合而触发，第二信号由抗原呈递细胞膜表面的共刺激蛋白(co-stimulatoryprotein)与T细胞表面的相应共受体蛋白(co-receptor protein)结合而触发。共受体蛋白包括CD28、OX40和CD137等。在激活通路中，T细胞受体通过TCR/CD3这一跨膜蛋白复合物将触发的信号传导至细胞内，CD3ζ在这一过程中发挥重要作用，T细胞被正向通路激活后，可以大量扩增、释放促进免疫反应的细胞因子并杀伤靶细胞。

除了正向激活通路之外，还存在负向抑制通路。负向抑制通路可以抑制T细胞的活化并使之功能耗竭，从而对免疫反应起到负调控作用。在负向抑制通路中，PD-1受体是体内最为重要的一个共抑制蛋白。PD-1受体为一型跨膜蛋白，在活化的T细胞、B细胞、活化的NK细胞、单核细胞、未成熟的朗格汉斯细胞等细胞中表达。在人体中，PD-1受体有两个配体PD-L1和PD-L2。生理状态下，T细胞表达的PD-1受体与PD-L1或PD-L2配体的结合能负向调节T细胞的增殖和细胞因子产生。

多种肿瘤细胞利用了这一负向调控机制，它们可以通过转录、转录后调控及表观遗传等机制直接上调PD-L1或PD-L2配体的表达。肿瘤细胞表面的PD-L1或PD-L2配体与T细胞上的PD-1受体结合，抑制T细胞的激活，从而避免被免疫细胞攻击。PD-L1或PD-L2配体高表达于各种肿瘤组织，包括非小细胞肺癌、黑色素瘤、肾细胞癌、前列腺癌、乳腺癌、胶质瘤等，PD-L1或PD-L2配体与T细胞上的PD-1受体结合后，可以使T细胞变得无能、功能耗竭、失去增殖及杀伤肿瘤细胞的能力。

CD19，是一种属于Ig超家族成员的穿膜糖蛋白，其广泛表达于不同时期B细胞表面，包括前B细胞，不成熟B细胞，成熟B细胞，活化B细胞等。在大部分B细胞恶性肿瘤中(例如，慢性淋巴性白血病，急性B淋巴性白血病和弥漫性大B细胞淋巴癌等)，CD19广泛表达，但骨髓中干细胞不表达CD19。因此，CD19是B细胞恶性肿瘤的理想肿瘤靶点。

过继细胞免疫治疗是一种肿瘤免疫治疗方法，采用嵌合抗原受体T细胞(CAR-T细胞)杀伤癌细胞则是过继细胞免疫治疗方法中的一种。嵌合抗原受体(CAR)包含胞外特异识别肿瘤抗原的scFv片段(或称抗原识别结构域)，铰链区，跨膜区和胞内信号域依次连接组成。当靶细胞上的抗原与嵌合抗原受体(CAR)的抗原结构域结合时，通过铰链区和跨膜区将信号传递至胞内，胞内信号域将信号转化为活化信号，激活效应细胞进行增殖、产生细胞因子和穿孔素等杀伤靶细胞。

CD19已被报道在肿瘤治疗中作为CAR-T细胞的靶点，尤其是在血液瘤的治疗中取得高水平的客观缓解率。但针对CD19的CAR-T细胞产品易导致患者复发，深入研究显示其复发机制跟CD19抗原逃逸相关，而联立靶向多重抗原可以克服抗原逃逸的弊端，因此开发多靶点CAR-T细胞产品显得日趋重要。

发明内容