[发明专利]一种提高碱性蛋白酶发酵活力的生产方法

权利要求书

1.一种碱性蛋白酶制备用发酵培养基，其特征在于，该培养基用于地衣芽孢杆菌发酵制备碱性蛋白酶用；所述发酵培养基，为液态，以质量百分含量计，发酵培养基中含有：玉米淀粉或可溶性淀粉1.5~3.5%、棉仁蛋白粉0.5~2.5%、磷酸氢二钠0.1~0.3%、磷酸二氢钾0.1~0.2%、氯化钙0.02~0.03%。

2.如权利要求1所述碱性蛋白酶制备用发酵培养基，其特征在于，玉米淀粉2~3%、棉仁蛋白粉1~2%、磷酸氢二钠0.15~0.25%、磷酸二氢钾0.1~0.2%、氯化钙0.02~0.03%。

3.如权利要求2所述碱性蛋白酶制备用发酵培养基，其特征在于，玉米淀粉2.5%、棉仁蛋白粉1.5%、磷酸氢二钠0.2%、磷酸二氢钾0.15%、氯化钙0.025%。

4.利用权利要求1~3任一项所述发酵培养基的提高碱性蛋白酶发酵活力的生产方法，其特征在于，该方法具体包括如下生产步骤：

（1）菌种活化

以地衣芽孢杆菌作为发酵菌株，首先将地衣芽孢杆菌进行菌种复苏，然后将进行活化菌株；

（2）种子培养

将步骤（1）中复苏、活化后菌种接入种子培养基中，35~38℃恒温、180~250r/min转速摇床培养28~37h，以此作为种子液；

将种子液接种入含有灭菌后一级种子培养基的发酵罐中，35~38℃、210~270 r /min发酵培养20~30h，以此作为一级种子液；

发酵过程中，发酵罐压保持在0.05~0.08Mpa，发酵液与通气量比（V/V▪min）为1：0.45~0.8；

（3）发酵制备碱性蛋白酶

将步骤（2）中所制备一级种子液接种入发酵培养基，35~38℃、180~210 r /min发酵培养20~30h；再补充补料培养基，同样条件下继续发酵培养20~24h；

发酵过程中，发酵罐压保持在0.05~0.08Mpa，发酵液与通气量比（V/V▪min）为1：0.45~0.8；

所述补料培养基，为玉米糖浆和棉仁蛋白粉的混合物，以质量比计算，玉米糖浆：棉仁蛋白粉=5~8：2~3；

发酵结束后所得即为含有碱性蛋白酶的发酵液。

5.如权利要求4所述提高碱性蛋白酶发酵活力的生产方法，其特征在于，步骤（1）中，所述地衣芽孢杆菌发酵菌株采用中国工业微生物菌种保藏管理中心保藏号为CICC 10266的地衣芽孢杆菌菌株。

6.如权利要求4所述提高碱性蛋白酶发酵活力的生产方法，其特征在于，步骤（2）中，所述种子培养基，为液态，以质量百分比计，培养基中含有：蛋白胨1%、牛肉膏0.5%、氯化钠1%、葡萄糖2%。

7.如权利要求4所述提高碱性蛋白酶发酵活力的生产方法，其特征在于，步骤（2）中，所述一级种子培养基，以质量百分含量计，培养基组成为：葡萄糖0.5%，玉米淀粉2%，棉仁蛋白粉 1.2%，磷酸二氢钾0.2%，pH自然。

8.如权利要求4所述提高碱性蛋白酶发酵活力的生产方法，其特征在于，步骤（3）中，将一级种子液接种入发酵培养基后，先发酵培养24h；再补充补料培养基，同样条件下继续发酵培养24h；

补料培养基中玉米糖浆用量为发酵培养基中原玉米淀粉或可溶性淀粉用量2倍，棉仁蛋白粉用量为发酵培养基中原棉仁蛋白粉用量2倍。