[发明专利]一种酶标抗体的制备方法在审
申请号: | 201810871744.9 | 申请日: | 2018-08-02 |
公开(公告)号: | CN108956976A | 公开(公告)日: | 2018-12-07 |
发明(设计)人: | 谭宏亮;王彩红 | 申请(专利权)人: | 江西师范大学 |
主分类号: | G01N33/535 | 分类号: | G01N33/535 |
代理公司: | 南昌华成联合知识产权代理事务所(普通合伙) 36126 | 代理人: | 黄晶 |
地址: | 330000 江西*** | 国省代码: | 江西;36 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 抗体 酶标抗体 制备 过氧化物酶 催化活性 复合材料 双功能 比色 酶联免疫吸附测定法 金属有机框架 免疫分析实验 信号放大作用 检测灵敏度 免疫分析法 共价结合 生物降解 影响抗体 捕获 应用 对抗 | ||
本发明公开了一种制备酶标抗体的新方法。由于酶联免疫吸附测定法在实际应用中经常存在一些不可避免的问题,特别是基于共价结合的酶标抗体的繁琐制备。因此,本发明将抗体与具有过氧化物酶催化活性的金属有机框架(MOF)结合形成双功能的MOF/抗体复合材料,该双功能的MOF/抗体复合材料能够应用于比色免疫分析法。MOF非但不影响抗体对抗原的捕获能力,而且能使抗体免受高温和生物降解影响,增强了抗体的稳定性。更重要的是,在比色免疫分析实验中,具有过氧化物酶催化活性的MOF可起信号放大作用,提高检测灵敏度。本发明的方法具有操作简便、成本低和效率高等优点。
技术领域
本发明涉及利用催化性MOF与抗体结合制备酶标抗体进行比色免疫分析,特别是利用MOF与抗体结合制备酶标抗体这一方法,属于MOF作为生物传感器材料的制备及应用领域。
背景技术
酶联免疫吸附测定法(ELISA)是一种常见的分析方法,其广泛应用于疾病诊断、环境分析、食品监控等方面。这是因为它有着操作简便,灵敏度高,专一性好等优势。但是,在实际应用中仍然存在一些问题,其中,最值得关注的问题是酶标抗体的制备与纯化。传统的酶标抗体通常用酶和抗体通过共价结合制备得到,由于共价结合过程繁琐,部分酶不可避免地会失活,抗体对抗原的识别效率也会随之降低,结果导致免疫系统检测灵敏度相对降低。而且,酶是一种天然蛋白质,稳定性容易受到外界环境的影响,虽然有研究者利用催化性纳米材料或者他们的复合物来代替自然酶,但是两者之间的复杂共价连接仍然无可避免。因此,在ELISA的实际应用中,简单、低费用、高效的酶标抗体制备方法仍然必不可少。
金属有机框架(MOF)是一种由金属离子和有机配体构建的混合材料。由于其大的比表面以及可调节的多孔结构和性能,使其在各个领域得到了广泛的研究。特别是通过用MOF作载体包埋生物分子构建MOF复合物,这一研究近年来受到了广泛的关注。典型的例子是MOF作载体包埋自然酶,其中包括辣根过氧化物酶(HRP)。与传统的游离酶相比,MOF 作载体不仅可提供较高的包埋效率,而且可保护酶较少受外界环境的影响。与此同时,通过与酶的协调作用,MOF能有效防止酶损失。因此,通过用MOF包埋酶,可以有效改善酶的催化活性。更重要的是,最近有研究表明用MOF包埋酶后,即使在变性条件下,酶的结构以及生物功能仍得以保持。然而,目前的研究主要集中于包埋自然酶,以提高其催化活性,用MOF包埋其他生物分子却鲜有报道。特别是催化性MOF作载体包埋抗体达到信号放大效果仍处于探索中。
发明内容
针对传统的酶标抗体的制备方法繁琐、酶活性损失大、产率低等技术现状,本发明提供一种新的酶标抗体的制备方法,该方法将抗体与具有过氧化物酶催化活性的金属有机框架 (MOF)结合形成双功能的MOF/抗体复合材料(酶标抗体)。
本发明采用的技术方案为:
一种酶标抗体的制备方法,其特征在于:包括使抗体与具有过氧化物酶催化活性的金属有机框架结合的步骤。
所述方法的具体步骤为:将金属盐水溶液与配体的乙醇-水(v/v=1:1)混合溶液混合,加入一定量的抗体,在4℃条件下反应一段时间后,分离出固态产物,即得到所述的酶标抗体。
优选的,所述的金属盐是二水合氯化铜(CuCl2·2H2O)。
优选的,所述的配体是4,4’-联吡啶。
优选的,所述的抗体是兔抗鼠IgG(RIgG)。
优选的,所述的金属盐与配体的摩尔比为1:4。
优选的,所述的反应时间为12h。
优选的,通过离心分离出固态产物,离心条件为13000rpm、5min。
优选的,还包括洗涤步骤,用水洗涤固态产物3次。
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