[发明专利]一种监测空气中小麦白粉病菌的方法

说明书

本发明涉及小麦白粉病菌的监测方法，具体是一种监测空气中小麦白粉病菌的方法，包括以下步骤：A、前处理：使用改造的空气颗粒物综合采样器连续采集空气中的小麦白粉病菌，离心后使用试剂盒提取DNA并纯化，得到样品DNA；B、PCR扩增反应：以PCR引物对样品DNA进行PCR扩增；其中，上游引物为：5'‑AAGCTATGCGGAACTTCGTTT‑3'；下游引物为：5'‑TAAGGAGTTTTGGCAAGTCCC‑3'，通过本发明公开的技术手段成功检测到空气中的小麦白粉病菌，且该方法成本低、操作简便，为气传植物病原真菌的测报提供了一种新方法。

技术领域

本发明涉及小麦白粉病菌的监测方法，具体是一种监测空气中小麦白粉病菌的方法。

背景技术

小麦白粉病是一种世界性病害，在各主要产麦国均有分布，我国山东沿海、四川、贵州、云南等地发生普遍、危害严重。近年来，其发生范围和面积不断扩大，已由南方和沿海地区不断扩展到华北、西北各大麦区、直至东北春麦区，亦有日趋严重之势。小麦白粉病菌可侵染小麦植株地上部各器官，多以叶片为主，发病重也侵染叶鞘、茎秆和穗，常造成小麦叶片早枯、光和效能较低、分蘖数和穗粒数减少成穗率降低，严重时造成高达45％的产量损失。该病原菌属于气传植物病原真菌，其分生孢子随气流传播，遇到适宜条件便能成功侵染寄主，并造成危害。因此，监测空气中的小麦白粉病菌对掌握其流行规律和制定有效的防治策略及方案十分重要。

目前，常用的气传植物病原真菌监测方法是采用孢子捕捉仪进行样品收集，使用显微镜检测、人工培养或分子手段进行病原真菌的检测。然而，孢子捕捉仪的进气量通常较小，进口仪器采购费用昂贵、后期维护保养不便、维修周期长、维修费用昂贵。显微观察则工作量大、耗时多、所需样品量较大。诸如小麦白粉病菌等活体寄生的病原菌，不能进行人工培养。

随着分子生物学的发展，利用PCR扩增技术检测病原微生物成为当下研究热点。主要原因是：基于PCR扩增技术检测，不仅检测准确性高、且检测效率高，如中国专利号为CN201610694143.6，公开“一种检测马铃薯青枯病菌的引物及其PCR检测方法”，通过该专利文献报道的PCR检测技术手段，成功以一种高效、高准确的方式检测马铃薯青枯病菌。

然而，目前关于空气中小麦病原真菌，尤其是小麦白粉病的PCR检测，则显少有报道；或者报道的技术方案较为落后，检测效果不理想，针对现有技术不足，至今未有一种实施有效方式解决。而对空气中小麦白粉病菌的长期、连续采样及PCR检测，目前未见报道。

发明内容

(一)解决的技术问题

针对上述现有技术存在的不足，本发明提供一种监测空气中小麦白粉病菌的方法，通过本发明公开的技术手段，成功检测到了空气的小麦白粉病菌。该方法成本低、操作简便，为气传植物病原真菌的测报提供了一种新方法。

(二)技术方案

为实现以上目的，本发明通过以下技术方案予以实现：

一种监测空气中小麦白粉病菌的方法，包括以下步骤：

A、前处理：使用改造的空气颗粒物综合采样器连续采集小麦白粉病菌，每周更换1次滤膜；完成采样的滤膜保存于灭菌的50mL离心管中，置于-25-18℃保存；在离心管中加15-30mL PBS缓冲液，2-6℃离心，控制离心力为200×g，离心2.5-3.5小时；取离心后的液体600-1000μL，使用试剂盒提取DNA并纯化，得到样品DNA；

B、PCR扩增反应：以PCR引物对样品DNA进行多重PCR扩增；其中，上游引物为：5'-AAGCTATGCGGAACTTCGTTT-3'；下游引物为：5'-TAAGGAGTTTTGGCAAGTCCC-3'；

所述PCR扩增反应体系的总体积为30ul，PCR扩增反应体系如下：