[发明专利]一种快速扩繁三七愈伤组织的培养体系和培养方法

说明书

本发明涉及组织培养技术领域，具体公开了一种快速扩繁三七愈伤组织的培养体系和培养方法。所述培养体系中仅加入两种激素，分别为2,4‑D和KT，且所述培养体系中2,4‑D和KT的质量浓度比为(1‑4):(0.05‑0.5)，优选为2,4‑D 3mg/L，KT 0.25mg/L。利用本发明所提供的培养体系可快速扩繁三七愈伤组织，愈伤组织出愈快，生长旺盛，出愈时间仅1个月，愈伤组织呈现颗粒状、结构疏松、且无褐化情况。

技术领域

本发明属于组织培养技术领域，具体地说，涉及一种快速扩繁三七愈伤组织的培养体系和培养方法。

背景技术

三七，又名田七，享有“金不换”、“南国神草”、“人参之王”等美誉，为五加科人参属植物三七的根及根茎，具有止血散瘀等功效，是我国特有的名贵中药材。

三七主要的化学成分包括皂苷类成分和非皂苷类成分两大类，皂苷类成分主要为达玛型四环三萜，而非皂苷类成分主要有三七素、蛋白质类、多糖类、黄酮类、炔、醇类、挥发油、微量元素及其一些其他的成分(夏鹏国，张顺仓，梁宗锁，等.三七化学成分的研究历程和概况.中草药，2014，45(17):2564-2570)。三七性甘、微苦，温，具有散瘀止血，消肿定痛的功效，多用于咯血、吐血、便血、崩漏、外伤出血、胸腹刺痛、跌扑肿痛(国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部).北京:中国医药科技出版社，2010:70)。现代药理研究表明三七具有抗炎、抗肿瘤、保护心血管系统(Wang Z，Chen Y Y，Pan H J，et al.SaponinAccumulation in Flower Buds of Panax notoginseng.Chinese Herbal Medicines，2015(2):179-184)、提高免疫力作用(马岩岩.三七皂甙成分对脂多糖诱导巨噬细胞炎性因子的影响及其机制的研究.暨南大学，2013)、改善血液循环(李媛，李强，姜泽.三七中黄酮类成分的研究进展.齐鲁药事，2012，32(2):109-111)、抑制肝肿瘤细胞转移(陈培丰，刘鲁明，陈震，等.三七醇提液对恶性肿瘤肝转移的干预作用.中西医结合学报，2006，4(5):500-503)等多种药理作用。

三七化学成分种类众多，药理作用广泛，成为云南白药、丹参滴丸、血塞通等中成药的主要原料药。近些年来对三七的开发利用逐渐深入，市场需求量大，三七的市场价值逐渐升高，导致供不应求。同时，人工栽培是满足三七市场需求的主要措施之一，但三七为多年生草本植物，对生态环境具有特殊要求性，生长分布区狭窄，加之连作障碍严重等问题，适宜其栽培的区域锐减。中药材质量主要是活性成分组成及其含量。活性成分多属于植物次生代谢物质，其合成积累受多种因素的影响，包括产地、品种、加工方法、采收期等。

通过愈伤组织培养技术，既可以快速繁殖三七种苗，又可以直接提取次生代谢产物，是解决上述问题的途径之一(黄勇，张铁，张文生，等.三七组织培养研究综述.文山学院学报，2012；25(6)：13-15)。

发明内容

本发明的目的是在无菌条件下，采用幼嫩的外植体，通过调节激素比例，优化三七愈伤组织生长的最佳配方，提供一种快速扩繁三七愈伤组织的培养体系和培养方法。

为了实现本发明目的，本发明的技术方案如下：

第一方面，本发明提供一种快速扩繁三七愈伤组织的培养体系，所述培养体系中仅加入两种激素，分别为2,4-D和KT。

作为优选，所述2,4-D和KT的质量浓度比为(1-4):(0.05-0.5)。

作为优选，所述培养体系中，2,4-D的浓度为1-4mg/L，KT的浓度0.05-0.5mg/L。

进一步优选，所述培养体系中，2,4-D的浓度为2-4mg/L，KT的浓度0.1-0.5mg/L。

更为优选，所述培养体系中，2,4-D的浓度为3mg/L，KT的浓度0.25mg/L。