[发明专利]一种β2微球蛋白测定试剂盒及其检测方法

说明书

本发明提供一种β2微球蛋白(β2‑MG)测定试剂盒，包括试剂R1、试剂R2，所述试剂R1包含如下浓度的组分：第一缓冲液、无机盐、促凝剂、防腐剂；所述试剂R2包含如下浓度的组分：第二缓冲液、稳定剂、抗冻剂、无机盐、表面活性剂、封闭剂、乳胶颗粒抗人β2‑MG抗体结合乳液、防腐剂。本发明属于生物检测技术领域，本发明提供的β2微球蛋白(β2‑MG)测定试剂盒在提高胶乳试剂稳定性的同时兼顾了检测灵敏度和线性范围，显著提高了测定试剂的灵敏度和稳定性，具有良好的抗冻性能，可适用于各类全自动生化分析仪进行分析，适应性好。

技术领域

本发明属于生物检测技术领域，尤其涉及一种β2微球蛋白(β2-MG)测定试剂盒及其检测方法。

背景技术

β2微球蛋白(β2-microglobulin，β2-MG)是一种内源性低分子量血清蛋白质，是由淋巴细胞、血小板、多形核白细胞产生的一种小分子球蛋白，分子质量为11800，由99个氨基酸组成的单链多肽，在免疫应答中起重要作用。血清β2-MG极易通过肾小球滤过膜，滤过的β2-MG 99.9％在近端肾小管吸收，并在肾小管上皮细胞中分解破坏，不再返流入血。正常人β2-MG的合成速度和细胞膜释放的量是非常恒定的，从而使β2-MG含量保持稳定水平。β2微球蛋白的升高可反映肾小球滤过功能受损或滤过负荷是否增加的情况，临床上检测血或尿中的β2-MG浓度为临床肾功能测定、肾移植成活、糖尿病肾病、重金属镉、汞中毒以及某些恶性肿瘤的临床诊断提供较早、可靠和灵敏的指标。

基于β2-MG的特性和临床应用价值，加之因β2-MG血清浓度较低，测定方法需较高的分析灵敏度及特异性，其检测方法也在不断发展。临床上测定β2-MG的方法有单向免疫扩散法、放射免疫分析法(RIA)、酶联免疫吸附法(ELISA)、时间分辨荧光免疫分析法、胶乳增强免疫比浊法等。单向免疫扩散法、放射免疫分析法、荧光免疫分析法等测定方法都为非均相检测，操作复杂且耗时长，不便广泛临床应用且不适合急诊样本的检测。近年来，应用较多的是胶乳免疫比浊法，此方法为均相测定，具有检测快速精准、灵敏度高、特异性强、精密度好、成本较低，且检测样本量少，可进行少量样本和急诊样本的测定等优点。其基本原理是：将抗体包被在胶乳颗粒上，与相应抗原发生免疫反应后，形成聚集颗粒，在一定波长下，通过测定聚集物所产生的浊度，即可测出标本中被检物的含量。

现有胶乳免疫比浊法，部分采用化学偶联法将特异性抗体结合于多种粒径组合的复合胶乳上，虽可兼顾检测灵敏度和线性范围，但胶乳试剂制备操作繁琐，易导致复合胶乳重复性差、稳定性差等。且胶乳试剂制备过程中，多采用超声波处理技术及离心与重悬，操作繁琐，制备时间较长，试剂均一性和稳定性较难控制。此外，β2微球蛋白测定试剂盒属于临床生化诊断试剂盒，

需要在低温(2～8℃)状态下贮存及运输，否则会破坏试剂的稳定性，进而影响检测准确性。目前，临床生化诊断试剂盒的冷链运输需要专门的冷链运输工具，包括冷藏车、冷藏船、冷藏集装箱等，但这些运输工具结构复杂，且成本极高，仅仅适合大批量运输，难以满足单个或小批量多次运输的需求。对此，市面上销售的β2微球蛋白测定试剂盒，在小批量运输过程中普遍采用具有隔热、防水、抗震、抗老化和价格低廉等特点的独立泡沫保温箱，添加若干块在-20℃～-30℃预冷的冰袋，再将β2微球蛋白测定试剂盒放入泡沫保温箱内的方式进行贮运或运输。

中国专利申请CN 105606822 A公开了一种β2-微球蛋白检测试剂盒，包括试剂R1、试剂R2，所述的试剂R1为含PEG6000和NaCl的缓冲液，所述的试剂R2为β2-微球蛋白抗体致敏聚苯乙烯胶乳颗粒与缓冲液的混合物，含小牛血清白蛋白和葡萄糖等，但耐候性较差，可能存在贮运或运输过程中试剂盒成分发生冻结进而导致质量受影响的问题。

因此，提供一种能够解决抗冻问题而又不影响试剂盒检测性能的β2微球蛋白(β2-MG)测定试剂盒具有重要意义。

发明内容