[发明专利]一种不依赖于基因型的植物基因编辑方法

权利要求书

1.一种不依赖于基因型的植物基因编辑方法，其特征在于，以含有基因编辑功能元件的转基因植物株系和具有单倍体诱导效率的植物株系作为基础材料，制备用于基因编辑的具有工具属性的基因编辑中间载体工具，利用该基因编辑中间载体工具，通过杂交同时实现植物单倍体诱导和目标基因编辑，所述基因编辑功能元件包含具有引导基因编辑酶到目标靶点的gRNA序列。

2.根据权利要求1所述的植物基因编辑方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤一、构建一种含有基因编辑功能元件的植物表达载体，该植物表达载体进入植物体内后能够实现对目标基因的有效编辑；

步骤二、以能够遗传转化的植物材料作为受体材料，利用构建的植物表达载体，进行植物遗传转化，培育转基因植物植株；

步骤三、含有基因编辑功能元件的转基因植物株系与具有单倍体诱导效率的植物株系进行杂交，产生F1代植株和后代衍生材料，命名为基因编辑中间载体工具；

步骤四、以基因编辑中间载体工具作为父本工具，对目标编辑植物株系进行授粉，获得杂交后代；

步骤五、杂交后代材料筛选获得单倍体，种植在温室或田间，单倍体植株加倍，去除杂合体和非整倍体；

步骤六、基因型分析，PCR测序鉴定获得基因编辑植株；

步骤七、自交授粉后获得非转基因、目的基因发生编辑的植物双单倍体纯合株系。

3.根据权利要求2所述的植物基因编辑方法，其特征在于，所述植物表达载体含有除草剂草铵膦抗性和基因编辑功能元件。

4.根据权利要求2所述的植物基因编辑方法，其特征在于，所述基因编辑功能元件为CRISPR-Cas9、CRISPR-cpf1、转录激活样效应因子核酸酶或锌指核酸酶。

5.根据权利要求2所述的植物基因编辑方法，其特征在于，步骤二中，所述受体材料为玉米品系、水稻品系、高粱品系或大豆品系。

6.根据权利要求5所述的植物基因编辑方法，其特征在于，所述玉米品系为HiII或B104，所述高粱品系为吉2731或keller，所述水稻品系为吉粳88或日本晴，所述大豆为Williams82或沈农9号。

7.根据权利要求2所述的植物基因编辑方法，其特征在于，步骤二中，所述植物遗传转化方法采用农杆菌介导的植物遗传转化方法。

8.根据权利要求2所述的植物基因编辑方法，其特征在于，步骤五中，采用选择小苗进行流式细胞仪检测方法或采用幼胚颜色筛选方法进行单倍体筛选。

9.根据权利要求2所述的植物基因编辑方法，其特征在于，步骤五中，采用除草剂涂抹方法，或采用Bar检测试纸进行检测，然后进行转基因载体元件PCR测序确认方法，或采用全基因组测序方法实现杂合体的去除。

10.根据权利要求2所述的植物基因编辑方法，其特征在于，步骤六中，采用编辑靶点PCR测序方法或采用全基因组测序方法进行基因型分析。

11.利用权利要求1至10中任意一项所述的植物基因编辑方法获得的基因编辑中间载体工具，其特征在于，该基因编辑中间载体工具同时具有植物单倍体诱导和目标基因编辑功能。

12.制备权利要求11所述的基因编辑中间载体工具的方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤一、构建一种含有基因编辑功能元件的植物表达载体，该植物表达载体进入植物体内后能够实现对目标基因的有效编辑；

步骤二、以能够遗传转化的植物材料作为受体材料，利用构建的植物表达载体，进行植物遗传转化，培育转基因植物植株；

步骤三、得到的转基因植物植株中选择具有基因编辑能力的的单株A作为父本，选择具有单倍体诱导效率的株系B作为母本进行杂交，产生的F1代或在后代中进一步筛选具有植物单倍体诱导能力且含有转基因成分的阳性植株即为基因编辑中间载体工具。