[发明专利]脑胶质瘤相关间充质干细胞亚群生物特性的检测方法有效

专利信息
申请号: 201810878554.X 申请日: 2018-08-03
公开(公告)号: CN108982846B 公开(公告)日: 2022-02-08
发明(设计)人: 付朋;赵洪洋;项炜;熊南翔;姜晓兵;张方成;张庆;易东晔;蔡晓立;薛冰洲 申请(专利权)人: 华中科技大学同济医学院附属协和医院
主分类号: G01N33/569 分类号: G01N33/569;C12Q1/6876;G01N33/68;G01N33/574
代理公司: 浙江千克知识产权代理有限公司 33246 代理人: 裴金华
地址: 430000 湖北*** 国省代码: 湖北;42
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摘要:
搜索关键词: 胶质 相关 间充质 干细胞 群生 特性 检测 方法
【说明书】:

发明公开了脑胶质瘤相关间充质干细胞亚群生物特性的检测方法,该种方法通过对细胞亚群的建立和分离,以及体内和体外的检测试验,体外包括免疫荧光法、流式细胞术、ELISA实验、Transwell实验、CCK8测试、划痕试验、Adhesion assay和血管生成试验,通过多种手段和方向对细胞亚群的生物特性进行逐步确定,为肿瘤靶向治疗提供了非常好的技术支持和根据;同时通过基因技术对细胞亚群的RNA进行差异性检测,从而可以对治疗靶点的确定提供了很好的帮助。

技术领域

本发明涉及细胞检测技术领域,具体涉及脑胶质瘤相关间充质干细胞亚群生物特性的检测方法。

背景技术

脑胶质瘤是起源于脑部神经胶质细胞,是最常见的颅内肿瘤,约占所有颅内肿瘤的45%左右。在儿童恶性肿瘤中排第二位,近30年来,原发性恶性脑肿瘤发生率逐年递增,年增长率约为1.2%,中老年人群尤为明显。中国脑胶质瘤年发病率为3-6人/10万人,年死亡人数达3万人。

脑胶质瘤在发生之初,通常没有典型的症状。随着肿瘤的不断增大,会表现出如下症状:一是颅内压增高和其他一般症状,如头痛、呕吐、视力减退、复视、癫痫发作和精神症状等。另一是脑组织受肿瘤的压迫、浸润、破坏所产生的局部症状,局部症状依肿瘤生长位置不同而异。

胶质瘤系浸润性生长物,它和正常脑组织没有明显界限,难以完全切除,对放疗化疗不甚敏感,非常容易复发,生长在大脑等重要部位的良、恶性肿瘤,手术难以切除或根本不能手术。化学药物和一般抗肿瘤的中药,因血脑屏障等因素的影响,疗效也不理想,因此脑胶质瘤至今仍是全身肿瘤中预后最差的肿瘤之一。

间充质干细胞是干细胞的一个研究分支,干细胞是一类具有自我复制和多向分化能力的细胞,它们可以不断地自我更新,并在特定条件下转变成为一种或多种构成人体组织或器官的细胞。干细胞是机体的起源细胞,是形成人体各种组织器官的始祖细胞。

一类存在于多种组织,具有多向分化潜力,非造血干细胞的成体干细胞。这类干细胞具有向多种间充质系列细胞或非间充质系列细胞分化的潜能,并具有独特的细胞因子分泌功能,细胞模型被应用于增殖、移植和分化研究,以及体外的免疫反应的鉴定。

胶质瘤的生长和快速繁殖与肿瘤内某种特异性细胞有关,所以对该种特异性细胞的生物特性的检测、确定在肿瘤医学研究中尤为重要,由于肿瘤的形成和生长因素和诱因非常复杂,需通过大量实验进行方法的筛选和优化才能确定肿瘤中不同细胞亚群具有的不同特性,因为不同生物特性对肿瘤的发展具有不同的促进作用,所以当这种细胞亚群的生物特性被确定后,会给肿瘤的靶向研究带来深远的意义。

发明内容

本发明的目的在于,针对上述现有技术的不足,提出脑胶质瘤相关间充质干细胞(glioma-associated mesenchymal stem cells, gbMSCs)亚群生物特性的检测方法,通过对CD90high gbMSCs和CD90low gbMSCs两种细胞亚群进行体内和体外测试,确定其生物特性,为脑胶质瘤的医学治疗和研究提供了更有效的方法。

本发明提出脑胶质瘤相关间充质干细胞亚群生物特性的检测方法,包括以下步骤:

(1)脑胶质瘤相关间充质干细胞的CD90high和CD90low两种细胞亚群采用免疫磁珠分离实验进行体外筛选分离,培养,鉴定;

(2)将脑胶质瘤相关间充质干细胞CD90high和CD90low两种细胞亚群分别进行体外检测,包括CCK8实验、Transwell 实验、细胞划痕实验、Adhesion assay和促内皮细胞成管实验;

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