[发明专利]一种铁皮石斛快速成苗的方法

权利要求书

1.一种铁皮石斛快速成苗的方法，其特征在于：所述培养步骤包括如下：

1）取材与消毒

从铁皮石斛植株上切下长2～5cm的幼嫩茎段，在流水下冲洗，用刷子蘸少许洗衣粉水溶液轻轻刷洗，并经自来水充分洗净，在超净工作台上将茎段放置在75%的酒精中消毒30s后，再用0.1%的HgCl2水溶液浸泡8～10min，无菌水冲洗5～6次；

2）诱导培养

诱导培养：用解剖刀将铁皮石斛的幼嫩茎段切下，接种在诱导培养基中进行培养；15～20天后，外植体开始萌动，茎段膨大，切面及顶部组织形成疏松组织；继续培养20天后，转入微放置室中，切面及顶部膨大组织的表面形成凹凸不平的颗粒物，随着培养时间的延长，颗粒物长大形成直径1～2mm的类原球茎颗粒物；培养条件为25℃，光照为1900 ~2200lx，光照时间为14h/d；

3）增殖分化培养

将诱导形成的原球茎转入到增殖分化培养基中，同时部分原球茎开始分化出芽点并长出1～2片小叶，原球茎的增殖与芽分化同时进行；：温度26℃，光照度2200~2500lx，光照时间为13h/d；

4）生根培养

待增殖芽数量较多时，将高1～2cm、带有2～3片叶的小芽切下转入生根培养基上进行生根培养，培养30天左右，基部开始出现2～3条约1cm长的白色根；，培养条件：温度25-26℃，光照度1700-2100 lx，光照时间为13-14h/d；

5）出瓶苗的过渡管理

当苗高3cm以上、具3～4片叶时，便可出瓶移栽，移栽前，将生根瓶苗打开瓶盖，然后将瓶苗取出，洗去附着在根部的培养基，用 0.01%的高锰酸钾溶液浸泡8～10min，栽种于已灭菌的碎树皮基质中，放置在遮光度50%～60%、湿度达80%以上的温室中。

2.根据权利要求1所述铁皮石斛快速成苗的方法，其特征在于：所述步骤2）中的诱导培养基由以下组分组成：MS基本培养基，6- 苄氨基腺嘌呤1.6 ～ 2.5mg/L，萘乙酸0.6 ～0.8mg/L，PQQ 0.5 ～ 1.5umol/L，植物提取混合物16 ～28mg/L，蔗糖80 ～ 120 mg/L，培养基功能液5 ～8mg/L。

3.根据权利要求3所述铁皮石斛快速成苗的方法，其特征在于：所述步骤3）中所述增殖分化培养基由以下组分组成：1/2MS基本培养基，6- 苄氨基腺嘌呤1.6 ～ 2.5mg/L，萘乙酸0.6 ～ 0.8mg/L，PQQ 0.5 ～ 1.5umol/L，植物提取混合物16 ～28mg/L，蔗糖40 ～ 60mg/L，维生素B2 0.2~0.3 mg/L；培养基功能液5 ～8mg/L。

4.根据权利要求4所述铁皮石斛快速成苗的方法，其特征在于：所述步骤4）中生根培养基由以下组分组成：1/2 MS基本培养基+吲哚丁酸IBA0 .5～2 .0mg/L+PQQ 0.5 ～1.5umol/L +胺鲜酯0 .02～0 .1mg/L+香蕉肉汁5～15g/L+柠檬酸5～12g/L+维生素B2 0.2~0.3 mg/L+植物提取混合物12 ～18mg/L+培养基功能液5 ～8mg/L；所述植物提取液由桑叶提取物、菱角叶汁以及鞣质组成；所述桑叶提取物、菱角叶汁以及鞣质三者之间的重量份比依次分别为5：8：1；所述培养基功能液由芦荟凝胶、皂甙以及棕榈酸组成；所述芦荟凝胶、皂甙以及棕榈酸的重量份比例依次分别为6:4:1。