[发明专利]抑制素B化学发光免疫检测试剂盒及其制备方法在审
申请号: | 201810880094.4 | 申请日: | 2018-08-03 |
公开(公告)号: | CN108982482A | 公开(公告)日: | 2018-12-11 |
发明(设计)人: | 鲁海冰;张旭东;高威;孙成艳;何浩会 | 申请(专利权)人: | 迪瑞医疗科技股份有限公司 |
主分类号: | G01N21/76 | 分类号: | G01N21/76;G01N33/577 |
代理公司: | 长春众邦菁华知识产权代理有限公司 22214 | 代理人: | 张伟 |
地址: | 130103 吉林*** | 国省代码: | 吉林;22 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 试剂盒 抑制素 化学发光免疫分析试剂 化学发光免疫检测 检测 单克隆抗体 制备 全自动化学发光免疫分析仪 化学发光标记物 标记物标记 链霉亲和素 酶联免疫法 测量数据 检测工具 临床检测 体外检测 无放射性 准确定量 准确度 磁颗粒 类目标 灵敏度 抗体 偶联 对抗 客户 替代 配套 | ||
1.一种抑制素B化学发光免疫检测试剂盒,包括:R1试剂、R2试剂和R3试剂;其特征在于,
所述R1试剂为用由50mM MES、0.05%吐温-20和0.05%Proclin300组成的pH值为6.5的缓冲液稀释的链霉亲和素磁颗粒固相试剂;
所述R2试剂为用由50mM MES、0.05%吐温-20和0.05%Proclin300组成的pH值为6.5的缓冲液稀释的化学发光标记物标记的抑制素B单克隆抗体溶液;
所述R3试剂为偶联标记物标记的抑制素B单克隆抗体溶液、甘油、和NaN3或ProClin300的混合溶液;所述偶联标记物标记的抑制素B单克隆抗体溶液和甘油体积相同,所述NaN3或ProClin300的体积为所述偶联标记物标记的抑制素B单克隆抗体溶液和甘油二者体积之和的0.1%。
2.根据权利要求1所述的抑制素B化学发光免疫检测试剂盒,其特征在于,所述链霉亲和素磁颗粒固相试剂的磁珠浓度为0.01%~1%。
3.根据权利要求1所述的抑制素B化学发光免疫检测试剂盒,其特征在于,所述链霉亲和素磁颗粒的粒径是0.05~3μm。
4.根据权利要求1所述的抑制素B化学发光免疫检测试剂盒,其特征在于,所述化学发光标记物标记的抑制素B单克隆抗体溶液中的抑制素B单克隆抗体与化学发光标记物的摩尔比为1:3~20。
5.根据权利要求1所述的抑制素B化学发光免疫检测试剂盒,其特征在于,所述偶联标记物标记的抑制素B单克隆抗体溶液中的抑制素B单克隆抗体与偶联标记物的摩尔比为1:5~20。
6.根据权利要求1所述的抑制素B化学发光免疫检测试剂盒,其特征在于,所述化学发光标记物标记的抑制素B单克隆抗体溶液中的化学发光标记物为吖啶酯、鲁米诺、异鲁米诺或三联吡啶钌。
7.根据权利要求1所述的抑制素B化学发光免疫检测试剂盒,其特征在于,所述偶联标记物标记的抑制素B单克隆抗体溶液中的偶联标记物为生物素、抗原、或者二者的衍生物。
8.根据权利要求1所述的抑制素B化学发光免疫检测试剂盒,其特征在于,还包括化学发光底物液,所述化学发光底物液包括A液和B液,所述A液为硝酸溶液,所述B液为氢氧化钠溶液。
9.根据权利要求1所述的抑制素B化学发光免疫检测试剂盒,其特征在于,还包括抑制素B校准品,其浓度分别为0.0pg/mL、20.0pg/mL、100.0pg/mL、250.0pg/mL、500.0pg/mL、1300.0pg/mL和1500.0pg/mL的抑制素B溶液。
10.一种权利要求1-7任意一项所述的抑制素B化学发光免疫检测试剂盒的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)R1试剂的制备
取链霉亲和素磁颗粒溶液,加入TBST溶液充分混匀后,放置于磁分离器上,直至上清无混浊,弃上清,留取磁颗粒,重复清洗3次后,用由50mM MES、0.05%吐温-20和0.05%Proclin300组成的pH值为6.5的缓冲液稀释后配制成链霉亲和素磁颗粒固相试剂;
(2)R2试剂的制备
将抑制素B单克隆抗体放入离心管底部位置后,加入碳酸缓冲溶液,充分混匀,混匀后加入化学发光标记物的DMF溶液,用离心机室温条件下离心,然后将离心管用封口膜密封后放入避光暗盒中,之后将暗盒放入气浴恒温振荡器中混匀,再加入赖氨酸封闭液,接着放入气浴恒温振荡器中速混匀后进行封闭;将封闭好的抗体上葡聚糖凝胶G250柱纯化,用PB缓冲液洗脱,分部收集,用由50mM MES、0.05%吐温-20和0.05%Proclin300组成的pH值为6.5的缓冲液稀释后配制成化学发光标记物标记的抑制素B单克隆抗体溶液;
(3)R3试剂的制备
取抑制素B单克隆抗体,用pH为6.5的TRIS缓冲液透析纯化后加入已活化的偶联标记物,于2~8℃反应后,再转入室温继续反应,最后加入赖氨酸继续反应,反应液用脱盐柱纯化,加入等体积甘油和0.1%NaN3或0.1%ProClin300,得到偶联标记物标记的抑制素B单克隆抗体溶液。
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