[发明专利]一种防治草坪草根腐病的菌种及发酵方法

说明书

本发明属于细菌鉴定分析技术领域，公开了一种防治草坪草根腐病的菌种及发酵方法，采用稀释平板法对细菌进行分离纯化，并在NA试管斜面上培养18～24h后于4℃冰箱保存；采用菌饼法平板对峙法计算抑菌率，初步筛选对两种及两种以上根腐病菌抑制率在50％以上的拮抗菌株；采用液培法于NB培养基中接种菌株HCST9，同时将等量的NB培养基加入PS培养基的对照培养瓶中，烘干后称重计算菌株的抑菌率；采用液培法和平板对峙法分别计算和测量抑菌率。本发明从生物防治手段入手，通过从草坪土壤中分离草坪草根腐病拮抗细菌，鉴定具有优良拮抗作用的细菌菌株，优化其摇瓶发酵条件，为将来大规模工业化发酵生产提供理论依据。

技术领域

本发明属于细菌鉴定分析技术领域，尤其涉及一种防治草坪草根腐病的菌种及发酵方法。

背景技术

草坪日益成为人们生活中必不可少的环境景观，但其病害危害比较严重。草坪根腐病是由多种病原菌单独或复合侵染引起，其病变主要发生在根部和根茎部，地上部的茎、叶早期变黄，后期则枯萎，降低了草坪的观赏价值，引起草坪根腐病的病原菌主要有镰刀菌属Fusarium sp、丝核菌属Rhizoctonia sp.、腐霉属Pythium sp.、平齐蠕孢属Biploarissp等，同时，德氏霉属Drechslera sp.、弯孢菌属Curuularia sp.等也可引起草坪根腐病症状。草坪病害的防治不同于其他农作物，在治理好草坪病害的同时，不能影响其的观赏和利用价值。在防治草坪草根腐病等真菌病害方面，目前，主要方法有选择抗病性强的草种和品种、采取科学的养护管理措施以及化学防治等，但是这些传统方法需要大量的人力物力，使用不当时，还会破坏生态平衡。因此，重视草坪根腐病菌防治研究并寻找新的生物防治方法具有重要意义。在生物防治中，利用有益微生物及其代谢产物来防治植物真菌病害很有效果。拮抗细菌因其种类和数量众多，繁殖速度快，代谢速度旺盛，在植株的表面和内部(内生细菌)、土壤的根际和根围等大量存在，且具有低毒、低残留、易分解、对靶标有较强的选择性、有促进植物生长和增产作用等显著优势，在植物病害防治中占据着重要的地位。目前国内外报导较多的拮抗细菌种类主要有芽孢杆菌(Bacillus spp.)、假单胞菌(Pseudomonasspp.)、土壤放射杆菌(Agrobacterium radiobacter)以及其他一些细菌。我国开发成功的有亚宝(枯草芽孢杆菌)、力宝(假单胞菌)、蜡质芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌等菌株都已经商品化，并取得了较好的防效。文凤云等通过克隆多粘类芽孢杆菌(Paenibaccillus polymyxa)CP7的β-1，3-1，4-葡聚糖酶基因，构建高效表达工程菌株。通过改良获得的工程菌较传统的生防菌具有杀菌谱更宽、毒力提高、抗紫外线、田间药效长、虫病兼治以及生物防治效率高等显著优势。与其他拮抗真菌和放线菌等相比，拮抗细菌生物防治效果更加明显。因此，如何筛选和改造拮抗菌株便成为了国内外学者研究的重点。

综上所述，现有技术存在的问题是：现有的研究发明中缺少对筛选和改造拮抗菌株的研究。

发明内容

针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种防治草坪草根腐病的菌种及发酵方法。

本发明是这样实现的，一种菌种，所述菌种为枯草芽孢杆菌。

本发明的另一目的在于提供一种利用所述菌种的防治草坪草根腐病的方法，所述防治草坪草根腐病的方法以2％的接种量于pH＝7的芽孢杆菌用四号基础培养基中，30℃恒温条件下培养60h。

本发明的另一目的在于提供一种利用所述菌种的发酵方法，所述发酵方法包括：以2％的接种量于pH＝7的芽孢杆菌用四号基础培养基中，30℃恒温条件下培养60h。