[发明专利]一种拮抗菌筛选方法

权利要求书

1.一种拮抗菌株筛选方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

(1)制备待筛选的样品液，将其涂布接种至平板1的表面并加以培养；(2)通过复印接种法将所述平板1表面生长的菌落转接种至已接种靶标微生物的平板2的表面，继续培养；(3)挑选平板2表面靶标微生物生长受抑制区域生长的菌落，即为所述靶标微生物的拮抗菌株。

2.根据权利要求1所述的筛选方法，其特征在于，所述步骤(1)包括：制备不同浓度的样品液，分别涂布接种至平板1的表面，待样品液被平板1吸收后，将其置于28℃～37℃下，倒置培养24h～72h，待菌落直径达到1mm～4mm后，选择菌落密为0.5个/cm²-1.5个/cm²的平板1作为被转接种的对象。

3.根据权利要求1所述的筛选方法，其特征在于，步骤(2)所述复印接种法利用绒布或者滤纸进行菌落转接，其中，优选绒布。

4.根据权利要求1所述的筛选方法，其特征在于，步骤(2)所述平板2通过以下方式接种：在加热融化的培养基凝固之前，加入靶标微生物的孢子悬浮液或菌体悬浮液，混合均匀，倒出至培养皿中冷却凝固后备用。

5.根据权利要求4所述的筛选方法，其特征在于，步骤(2)所述孢子悬浮液或菌体悬浮液的密度为0.5×10⁶个/mL～2×10⁶个/mL(优选为1×10⁶个/mL)，所述孢子悬浮液或菌体悬浮液的加入量为0.1mL/30mL～0.5mL/30mL(优选为0.25mL/30mL)培养基。

6.根据权利要求1所述的筛选方法，其特征在于，步骤(2)所述继续培养的条件包括：将菌落转接种至所述平板2后，将所述平板2置于28℃～37℃培养24h～72h。

7.根据权利要求1所述的筛选方法，其特征在于，所述方法还包括步骤(4)：对所述拮抗菌株做进一步验证；优选地，采取平板对峙法进行所述验证。

8.根据权利要求7所述的筛选方法，其特征在于，步骤(4)所述平板对峙法包括：

在平板3的中央接种直径为4mm～6mm(优选5mm)的靶标微生物，在距离所述菌饼边缘1.5cm～2.5cm(优选2cm)处接种所述拮抗菌株，于28℃～37℃培养24h～72h，验证所述拮抗菌株是否对所述靶标微生物具有显著的抑制作用。

9.根据权利要求1～8任一项所述的筛选方法，其特征在于，所述样品选自土壤、食品、水样和物体表面洗脱液中的一种或多种，优选地，所述样品为土壤。

10.根据权利要求1～8任一项所述的筛选方法，其特征在于，所述靶标微生物为病原微生物或污染微生物，优选地，所述病原微生物为植物的病原微生物，例如青霉或胶孢炭疽菌，所述污染微生物为农产品、食品、饲料中的污染微生物。