[发明专利]壳聚糖和唑来膦酸钠纳米化结核杆菌气溶胶的制备方法

权利要求书

1.一种壳聚糖和唑来膦酸钠纳米化结核杆菌气溶胶的制备方法，以壳聚糖和唑来膦酸钠为原料，其特征为，包括如下步骤：（1）将壳聚糖溶解于冰醋酸溶液中，调节pH值后搅拌状态下缓慢加入多聚磷酸钠溶液，得到均匀的乳白色悬液；向悬液中滴加溶解于无水乙醇的异硫氰酸荧光素，避光反应后调节pH值为弱碱性，经离心、洗涤后收集沉淀；将沉淀重新溶解后加入多聚磷酸钠溶液反应，得到荧光标记的壳聚糖纳米粒；（2）将唑来膦酸钠溶液、SnCl₂•2H₂O和盐酸溶液混合，调节pH值后加入⁹⁹Tc^mO4^-洗脱液，混合均匀后反应得到⁹Tc^m–唑来膦酸钠；（3）将荧光标记的壳聚糖纳米粒配制成浓度为10^-5、10^-4、10^-3 mol/L溶液，过滤，并真空抽滤；再加入⁹Tc^m–唑来膦酸钠得到样品，按照载药浓度分为4组：FITC-CM单纯材料组；10^-5 mol/L组；10^-4 mol/L组；10^-3 mol/L组；分别混匀上述溶液，持续搅拌，避光反应：（4）向4组样品中分别加入结核分歧杆菌标准毒株溶液，水浴后均匀漩涡，即制成FITC-CM/⁹⁹Tc^m-ZOL纳米粒包被的H37Rv乳悬液；乳悬液经气溶胶发生装置和气溶胶采样器处理得到产品。

2.根据权利要求1所述的壳聚糖和唑来膦酸钠纳米化结核杆菌气溶胶的制备方法，其特征在于：步骤（1）中，将2g壳聚糖溶解于20ml/L的100ml冰醋酸溶液中，持续搅拌至壳聚糖完全溶解，逐滴加入质量浓度1%的NaOH溶液至pH 值为4.98；取配制好的质量浓度为0.1%的多聚磷酸钠溶液5.25ml，搅拌下缓慢加入到上述溶液中，出现均匀的乳白色悬液；再称取10mg异硫氰酸荧光素，溶于10ml无水乙醇中，在磁力搅拌下逐滴加入到20ml壳聚糖醋酸溶液中，避光反应4h，用10mol/L的NaOH溶液调节pH 值至9；离心，用蒸馏水洗涤，直至滤液澄清呈无色为止；将沉淀重新用质量浓度为2%的醋酸溶液溶解，用10mol/L的NaOH溶液调节pH值至5，在磁力搅拌下逐滴加入10ml浓度为2g/L的多聚磷酸钠溶液，反应20min后得到荧光标记的壳聚糖纳米粒。

3.根据权利要求1所述的壳聚糖和唑来膦酸钠纳米化结核杆菌气溶胶的制备方法，其特征在于：步骤（2）中，取唑来膦酸钠250mg，加0.1M的NaOH溶液使其溶解，加水稀释至5ml；取10ml的1mol/L的盐酸溶解10mg SnCl₂•2H₂O混匀，配制1mg/ml的SnCl₂•2H₂O 溶液；于西林瓶中加入唑来膦酸钠溶液、SnCl₂•2H₂O 溶液，用磷酸盐缓冲溶液调节混合液的pH值，加入18.5MBq⁹⁹Tc^mO4^-洗脱液，充分混合均匀，室温反应8min，即得⁹Tc^m–唑来膦酸钠。

4.根据权利要求1所述的壳聚糖和唑来膦酸钠纳米化结核杆菌气溶胶的制备方法，其特征在于：步骤（3）中，室温下避光反应20min。

5.根据权利要求1所述的壳聚糖和唑来膦酸钠纳米化结核杆菌气溶胶的制备方法，其特征在于：步骤（4）中，将4组样品加入微量离心管中，每管100μL，取不同浓度的结核分歧杆菌标准毒株溶液分别加入各微量离心管中，于50℃水浴20 min，再均匀漩涡30s，即制成FITC-CM/⁹⁹Tc^m-ZOL纳米粒包被的H37Rv乳悬液。

6.根据权利要求1或5所述的壳聚糖和唑来膦酸钠纳米化结核杆菌气溶胶的制备方法，其特征在于：所述结核分枝杆菌标准毒株溶液的浓度分别为10²-10³CFU/ml、10³-10⁴CFU/ml、10⁴-10⁵CFU/ml、10⁵-10⁶CFU/ml、10⁶-10⁷CFU/ml、10⁷-10⁸CFU/ml、10⁸-10⁹CFU/ml和10⁹-10¹⁰CFU/ml。