[发明专利]添加有游离氨基酸的饲料中游离氨基酸的检测方法

说明书

本发明涉及饲料提取液的制备方法，该饲料中添加有游离氨基酸，该方法包括：(1)将1.0～2.0g待测饲料以及20mL 10％的磺基水杨酸溶液置于离心管中依次进行10min的震荡处理以及3～5min的超声处理；(2)将超声处理产物在4000r/min的条件下进行5min的离心处理，以便获得上清液，所述上清液为所述提取液。采用该提取方法使本发明的检测方法与现有技术相比，灵敏度大大提高，氨基酸含量在0.5％即可测出，并且能够准确测定各氨基酸(包括赖氨酸)的含量。

技术领域

本发明涉及食品领域，具体地，本发明涉及添加有游离氨基酸的饲料中游离氨基酸的检测方法，更具体地，本发明涉及饲料提取液的制备方法以及检测饲料游离氨基酸的方法。

背景技术

饲料中氨基酸的检测方法目前是以国家标准《GB/T 18246-2000饲料中氨基酸的测定》为主，但是该标准方法中前处理方法操作步骤比较繁琐。

因此，步骤简便、可操作性强、检测效果好的测定方法还需进一步研究。

发明内容

本申请是基于发明人对以下事实和问题的发现和认识作出的：

发明人发现，国标方法《GB/T 18246-2000饲料中氨基酸的测定》中记载的酸提取法不仅存在赖氨酸不能测准的问题，而且该方法的灵敏度很低，氨基酸含量在2.0％以上时才能够测出。

基于上述问题，发明人通过无数次的实验摸索后进一步发现，原因在于以下几个方面：其一，国标方法在提取过程中，样品浑浊，过滤速度太慢，特别是在测定赖氨酸时，预混料和浓缩饲料基质会有较大干扰，从而严重影响检测结果的准确性；其二，由于预混料和浓缩饲料基质成分复杂，因此，国标方法用稀盐酸进行了两次提取。而提取液合并后溶液体积又不能减少，由此，国标方法必须在步骤的最后将待测液定容至100mL，从而将样品稀释了100倍，导致国标方法的灵敏度大大降低。

最终，发明人通过改变提取试剂的种类及浓度，即用10％的磺基水杨酸溶液代替0.1mol/L的HCl溶液，同时配合震荡、超声以及离心处理，克服了上述问题，进而，相比现有技术，本发明检测方法的灵敏度大大提高，氨基酸含量在0.5％即可测出，并且能够准确测定各氨基酸(包括赖氨酸)的含量。另外，由于提取试剂(磺基水杨酸)的化学结构与氨基酸分析仪的分离柱内填料(填料为3μm磺酸型阳离子树脂)特性相近，使仪器的色谱柱寿命得到了很好的延续，柱效更高。

在本发明的第一方面，本发明提出了一种饲料提取液的制备方法，所述饲料中添加有游离氨基酸。根据本发明的实施例，所述方法包括：

(1)将1.0～2.0g待测饲料以及20mL 10％的磺基水杨酸溶液置于离心管中依次进行10min的震荡处理以及3～5min的超声处理；

(2)将超声处理产物在4 000r/min的条件下进行5min的离心处理，以便获得上清液，所述上清液为所述提取液。

在制备添加有游离氨基酸的饲料提取液的方法中，发明人发现，提取试剂的浓度与最终样品中添加的氨基酸的检测结果关系很大，若提取试剂磺基水杨酸溶液的浓度过高，会破坏待测氨基酸的结构，导致本发明检测方法的准确度和灵敏度降低；若提取试剂磺基水杨酸溶液的浓度过低，则提取不充分，导致本发明检测方法的灵敏度和准确度降低。采用根据本发明实施例的提取方法使本发明的检测方法与现有技术相比，灵敏度大大提高，氨基酸含量在0.5％即可测出，并且能够准确测定各氨基酸(包括赖氨酸)的含量。

在本发明的第二方面，本发明提出了一种饲料提取液的制备方法，所述饲料中添加有游离氨基酸。根据本发明的实施例，所述方法包括：

(1)将待测饲料以及10％的磺基水杨酸溶液置于离心管中依次进行震荡处理以及超声处理；

(2)将超声处理产物进行离心处理，以便获得上清液，所述上清液为所述提取液。