[发明专利]一种用于鉴别鲤、鲫和鲤鲫间杂交鱼的分子标记及其引物与应用有效
申请号: | 201810886217.5 | 申请日: | 2018-08-06 |
公开(公告)号: | CN108588244B | 公开(公告)日: | 2021-12-07 |
发明(设计)人: | 程磊;王乐;李超;鲁翠云 | 申请(专利权)人: | 中国水产科学研究院黑龙江水产研究所 |
主分类号: | C12Q1/6888 | 分类号: | C12Q1/6888;C12N15/11 |
代理公司: | 哈尔滨市阳光惠远知识产权代理有限公司 23211 | 代理人: | 邓宇 |
地址: | 150000 黑龙*** | 国省代码: | 黑龙江;23 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 用于 鉴别 间杂 分子 标记 及其 引物 应用 | ||
1.一种用于鉴别鲤、鲫和鲤鲫间杂交鱼的分子标记,其特征在于,所述分子标记的核苷酸序列如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示,具有SEQ ID NO.3所示核苷酸序列的样本鉴定为鲤;具有SEQ ID NO.4所示核苷酸序列的样本鉴定为鲫;同时具有SEQ ID NO.3及SEQ IDNO.4所示核苷酸序列的样本鉴定为鲤鲫间杂交鱼。
2.权利要求1所述的分子标记在鉴别鲤、鲫和鲤鲫间杂交鱼中的应用,其特征在于,所述应用中具有SEQ ID NO.3所示核苷酸序列的样本鉴定为鲤;具有SEQ ID NO.4所示核苷酸序列的样本鉴定为鲫;同时具有SEQ ID NO.3及SEQ ID NO.4所示核苷酸序列的样本鉴定为鲤鲫间杂交鱼。
3.一种用于鉴别鲤、鲫和鲤鲫间杂交鱼的分子标记引物对,其特征在于,其核苷酸序列如SEQ ID NO.1-2所示,其中:上游引物F的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示,下游引物R的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。
4.权利要求3所述的分子标记引物对在鉴别鲤、鲫和鲤鲫间杂交鱼中的应用,其特征在于,所述应用为上游引物F的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示,下游引物R的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示;通过所述引物对扩增出同时具有SEQ ID NO.3及SEQ ID NO.4所示核苷酸序列的样本鉴定为鲤鲫间杂交鱼;通过所述引物对只扩增出SEQ ID NO.3所示的481bp核苷酸序列的样本鉴定为鲤;通过所述引物对只扩增出SEQ ID NO.4所示的958bp核苷酸序列的样本鉴定为鲫。
5.一种用于鉴定鉴别鲤、鲫和鲤鲫间杂交鱼的试剂盒,其特征在于,所述试剂盒包含如SEQ ID NO.1-2所示的分子标记引物对。
6.一种鉴别鲤、鲫和鲤鲫间杂交鱼的方法,其特征在于,按照如下步骤进行:
1)提取待检验鱼样本的基因组DNA;
2)以待检验鱼样本的基因组DNA为模板,利用如SEQ ID NO.1-2所示的分子标记引物对进行PCR扩增反应,获得PCR产物;
3)电泳检测PCR产物,经检测若只得到长度为481bp的单一片段,则待检验鱼为鲤;若只得到长度为958bp的单一片段,则待检验鱼为鲫;若同时得到481和958bp两条片段,则待检验鱼为鲤鲫间的杂交鱼。
7.根据权利要求6所述的方法,其特征在于,步骤2)所述PCR扩增反应的反应体系是由30 ng/µL基因组DNA 1.0µL,10μmol/L上游引物F 0.6µL,10μmol/L下游引物R 0.6µL,2µL10×PCR Buffer,2µL 2mmol/L dNTP,1U Ex Taq酶和ddH2O组成的20µL反应体系。
8.根据权利要求6所述的方法,其特征在于,步骤2)所述PCR扩增反应的条件为94℃预变性2min;35个循环,每个循环94℃变性30s,60℃退火30s,72℃延伸1min;72℃终延伸7min。
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