[发明专利]一种缺失穿膜区的禽白血病病毒gp37蛋白的表达载体及其构建方法和蛋白表达方法

权利要求书

1.一种缺失穿膜区的禽白血病病毒gp37蛋白的表达载体，包括载体pGEX-6p-1和接入所述载体的gp37del基因，所述gp37del基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.权利要求1所述表达载体的构建方法，包括以下步骤：

1)以负载gp37基因全序列的pGEX-6p-1载体为模板，扩增出携带gp37胞浆区序列的pGEX-6p-1线性化表达载体；

2)以负载gp37基因全序列的pGEX-6p-1载体为模板，扩增出不含穿膜区和胞浆区序列的gp37片段；

3)利用重组酶ExnaseTM II对步骤1)得到的携带gp37胞浆区序列的pGEX-6p-1线性化表达载体和步骤2)得到的不含穿膜区和胞浆区序列的gp37片段进行快速重组克隆，得到缺失穿膜区的禽白血病病毒gp37蛋白的表达载体；

所述步骤1和步骤2)没有时间先后顺序的限制。

3.根据权利要求2所述的构建方法，其特征在于，步骤1)所述扩增用引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所示。

4.根据权利要求2所述的构建方法，其特征在于，步骤2)所述扩增用引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.5所示。

5.根据权利要求2所述的构建方法，其特征在于，每20μL步骤3)所述快速重组克隆的反应体系包括：不含穿膜区和胞浆区序列的gp37片段50～100ng、携带gp37胞浆区序列的pGEX-6p-1线性化表达载体50ng、重组酶ExnaseTM II 2μL、重组酶ExnaseTM II缓冲液4μL和余量的水。

6.根据权利要求2所述的构建方法，其特征在于，步骤3)所述快速重组克隆的反应条件为：37℃30min后，冰浴5min。

7.表达缺失穿膜区的禽白血病病毒gp37蛋白的菌株，其特征在于，所述菌株含有权利要求1所述表达载体或权利要求2～6任意一项所述构建方法得到的表达载体，所述菌株包括大肠杆菌。

8.缺失穿膜区的禽白血病病毒gp37蛋白的表达方法，包括以下步骤：

将权利要求7所述菌株进行培养，经IPTG诱导后收集菌体；

超声破碎所述菌体，将得到的破碎菌体离心后取沉淀；

将所述沉淀进行尿素变性再复性，得到缺失穿膜区的禽白血病病毒gp37蛋白。

9.一种抗禽白血病病毒gp37蛋白多克隆抗体，其特征在于，所述多克隆抗体制备用免疫原为权利要求1所述表达载体表达的缺失穿膜区的禽白血病病毒gp37蛋白或权利要求8所述表达方法获得的缺失穿膜区的禽白血病病毒gp37蛋白。