[发明专利]一种虾血细胞虹彩病毒株与红螯螯虾虹彩病毒株鉴别诊断的引物组及试剂盒在审
| 申请号： | 201810887517.5 | 申请日： | 2018-08-06 |
| 公开（公告）号： | CN108913814A | 公开（公告）日： | 2018-11-30 |
| 发明（设计）人： | 文珊 | 申请（专利权）人： | 文珊 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/686;C12N15/11 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 421431 湖南*** | 国省代码： | 湖南;43 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 虹彩病毒 血细胞 红螯螯虾 鉴别诊断 引物组 试剂盒 对虾血细胞 特异性扩增 特异性引物 专用试剂盒 病毒分离 引物 | ||
1.一种虾血细胞虹彩病毒株与红螯螯虾虹彩病毒株鉴别诊断的引物组，其特征在于，所述的引物组包括S1、S2、S3，其中：
S1：5’-ACTTAGGCTAGCATCACATTGG-3’；
S2：5’-CAATAAGCTGAGTCGACCGTATAA-3’；
S3：5’-ATAAGCTTAGTCGACTGAGG-3’。
2.一种如权利要求1所述的引物组在制备虾血细胞虹彩病毒株与红螯螯虾虹彩病毒株鉴别诊断试剂盒中的应用。
3.一种包含如权利要求1所述的引物组的虾血细胞虹彩病毒株与红螯螯虾虹彩病毒株鉴别诊断试剂盒。
4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒还包括核酸提取试剂、反转录试剂、PCR扩增试剂、和/或琼脂糖凝胶电泳试剂。
5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述的反转录试剂包括10×M-MLV缓冲液、dNTP、M-MLV反转录酶、RNase酶抑制剂、S2引物。
6.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述的PCR扩增试剂包括10×PCR扩增缓冲液、dNTP、S1引物、S2引物、Taq DNA聚合酶和双蒸水。
7.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述的PCR扩增试剂所构建的PCR扩增体系为：10×PCR扩增缓冲液5.0μL、2.5mmol/L dNTP8.0μL、10mmol/L S1引物1.0μL、10mmol/LS2引物1.0μL、5U/μL Taq DNA聚合酶1.0μL、模板3.0μL，补加双蒸水至50μL。
8.一种如权利要求3-7任一项所述的试剂盒的使用方法，其特征在于，包括核酸提取、反转录、PCR扩增和琼脂糖凝胶电泳。
9.根据权利要求8所述的试剂盒的使用方法，其特征在于，还包括对琼脂糖凝胶电泳的结果进行分析：当扩增片段为1700bp，则样本中的H3N2亚型猪流感病毒为红螯螯虾虹彩病毒株；当扩增片段大小为1400bp，则样本中的H3N2亚型猪流感病毒为病毒株。
10.根据权利要求8所述的试剂盒的使用方法，其特征在于，所述的PCR扩增条件为：95℃预变性5min；94℃变性30s，57℃退火30s，72℃延伸90s，共35个循环；最后72℃延伸10min。
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