[发明专利]检测冬生疫霉菌的LAMP引物对及其扩增方法和用途在审
| 申请号： | 201810888937.5 | 申请日： | 2018-08-07 |
| 公开（公告）号： | CN109486985A | 公开（公告）日： | 2019-03-19 |
| 发明（设计）人： | 姜一;张莹;牛春敬 | 申请（专利权）人： | 天津出入境检验检疫局动植物与食品检测中心 |
| 主分类号： | C12Q1/6895 | 分类号： | C12Q1/6895;C12Q1/6844;C12Q1/04;C12N15/11 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 300461 天津市滨*** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 疫霉菌 扩增 检测 植物病原真菌 基因组DNA 分子检测 检测领域 特异性强 植物产品 自行设计 种检测 疫霉 引物 合成 优化 | ||
1.一种检测冬生疫霉菌的LAMP引物对及其扩增方法和用途，其特征在于，自行设计的冬生疫霉菌的LAMP特异引物对，实现了对冬生疫霉菌的特异检测。序列如下：
PH-F3：AAT TGG CTA TGC AGG AGT TCA
PH-B3：TCC AGC CTT CTT GAT AGC CTC
PH-FIP：ACA CTT TTC AGG TTG TGG TAC ACC T-TT GGT GCC ACG AGC TT
PH-BIP：TTA AGG GTA GGT ATG GTT TGG ACG–AGC GTT TGC CTG GAT GTT
所述引物对用于植物及植物产品中冬生疫霉菌基因组DNA特异性检测。
2.一种检测冬生疫霉菌的LAMP扩增体系：总体积为25μL，包括10×ThermoPoL Buffer2.5μL(200mmol/L Tris-HCl、100mmol/L KCl、20mmol/L MgSO4、100mmol/L(NH4)2SO4、1.0％Tritonx-100)、2.5mmol/L dNTPs 2.5μL、100mmol/L MgSO4 1μL、权利要求1所述的引物，10mmol/L PH-F3 0.2μL、10mmol/L PH-B3 0.2μL、10mmol/L PH-FIP 1.6μL、10mmol/LPH-BIP 1.6μL、8U/μL Bst DNA Polymerase 1μL、DNA模板1μL，余量为双蒸水。
3.一种检测冬生疫霉菌的LAMP引物对及其扩增方法，使用权利要求2所述的扩增体系，反应程序为：63℃水浴锅中反应70min，之后在85℃下灭活5min结束反应。
4.权利要求1所述检测冬生疫霉菌的LAMP引物对及权利要求2、3所述的扩增体系和扩增方法在特异检测冬生疫霉菌方面的应用。
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