[发明专利]一株分解几丁质的类芽孢杆菌及其应用

说明书

一株分解几丁质的类芽孢杆菌及其应用，本发明涉及一株分解几丁质的类芽孢杆菌及其应用。本发明的目的是要解决现有在灰霉病防治上存在着农残隐患的问题，本发明的一株分解几丁质的类芽孢杆菌为类芽孢杆菌(Panenibacillus sp.)A10，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址是北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期是2018年2月02日，保藏编号为CGMCC No.15336。本发明的分解几丁质的类芽孢杆菌在植物病害防治上的应用。菌株A10对灰霉病有很好的拮抗作用，A10发酵液对灰霉病的抑制效果达到91.8％。本发明应用于环境微生物技术领域。

技术领域

本发明涉及一株分解几丁质的类芽孢杆菌及其应用。

背景技术

类芽孢杆菌是一种好氧或兼性厌氧的杆状菌，能产生抗逆性芽孢，具有独特的生理特性。据以往的报道，类芽孢杆菌在代谢过程中会产生多种抗菌活性物质，不仅在医疗、环境和植物生物防治等领域中均具有重要的应用价值。本研究的方向是以微生物的细胞壁为作用点，几丁质是真菌细胞壁的重要成分，通过分解病原真菌的细胞壁，破坏细胞膜的完整性，致使细胞内溶物外泄，或与细胞内的靶分子作用从而使病原微生物死亡。灰霉病是一种典型的气传病害，可随空气、水流及农作业传播，可引起多种果蔬，农作物患病。在实际病害防治过程中，难以采取有效措施彻底切断传染源，在病原菌侵入的情况下，也难以彻底消灭病原菌。因此，研发新型、高效、低毒的农用抗生素迫在眉睫。

发明内容

本发明的目的是要解决现有灰霉病主要防治方法存在着农残隐患的问题，提供了一株分解几丁质的类芽孢杆菌及其应用。

本发明一株分解几丁质的类芽孢杆菌为类芽孢杆菌(Panenibacillus sp.)A10，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址是北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期是2018年2月02日，保藏编号为CGMCC No.15336。

本发明一株分解几丁质的类芽孢杆菌的应用是指在水稻病害防治上的应用。

本发明采用野生稻根际土壤中进行分解几丁质的类芽孢杆菌菌株的分离纯化：

初筛：采用平板稀释涂布法，称取来源于江西东乡野生稻的根际土样5g于45ml无菌水中，120rpm，20min后静置，取上清进行10倍浓度梯度稀释。分别取10^-1、10^-2、10^-3浓度的稀释液各80μL，每个梯度涂布3个几丁质培养基平板上，用无菌水代替稀释液做空白对照。倒置于25℃培养箱中培养2-3天，观察菌落的生长及透明圈产生情况。(几丁质培养基：K₂HPO₄1g，MgSO₄·7H₂O0.5g，NaCl 0.5g，NH₄Cl 1g，琼脂15g加蒸馏水定容至1000ml，其中每80ml几丁质培养基中加入20ml1％胶体几丁质。)

复筛：在几丁质培养基上，将60多株透明圈较大但形态、颜色等不同形状的菌落分别挑选出来，进行平板划线，直至菌落单一，筛选出分解几丁质的类芽孢杆菌(Panenibacillus sp.)A10，参照《常见细菌系统鉴定手册》和《伯杰系统鉴定手册》中推荐的部分培养基和方法，鉴定A10菌株的生理生化特征发现，A10菌株的接触酶阳性，甲基红反应为阴性，V-P反应阴性，淀粉水解阳性，明胶液化，不产生硫化氢，吲哚阴性，对NaCl的耐受性为10％。