[发明专利]共载抗原、MPLA与IMQ的阳离子磷脂-聚合物杂化纳米粒疫苗佐剂及制备方法与应用

说明书

本发明涉及一种共载抗原、MPLA与IMQ的阳离子磷脂‑聚合物杂化纳米粒疫苗佐剂及制备方法与应用，该疫苗佐剂在疏水性内核包载TLR7激动剂咪喹莫特，在磷脂层包载TLR4激动剂单磷酰脂质A，通过磷脂层中的阳离子磷脂DOTAP吸附抗原，通过杂化纳米粒保护抗原并提高树突状细胞对抗原的摄取，通过TLR激动剂显著增强抗原刺激后的免疫应答并显著改善抗原交叉呈递；本发明的杂化纳米粒作为疫苗佐剂能够同时共负载抗原及不同类别的TLR激动剂，能以多种免疫途径递送抗原，促进DC活化与成熟，提高交叉提呈水平，产生强有力的T细胞杀伤效应，诱导细胞因子分泌，产生长效记忆性T细胞反应，对肿瘤有较好的预防能力。

技术领域

本发明涉及疫苗佐剂技术领域，具体涉及一种共载抗原、MPLA与IMQ的阳离子磷脂-聚合物杂化纳米粒疫苗佐剂及制备方法与应用。

背景技术

接种疫苗是预防传染病或抗癌的最有效方法之一。成功的疫苗应该能够产生针对特定病原体长期的体液和细胞免疫应答。树突状细胞(Dendritic cells, DCs)是专职性抗原呈递细胞(Antigen-presenting cells,APCs)，在先天性和适应性免疫应答的联系中起着关键作用。捕获和提呈抗原后，DCs将它们呈递给 T细胞并通过MHC-I类分子激发CD8⁺杀伤性T细胞(Cytotoxic T lymphocyte, CTL)应答或通过MHC-Ⅱ类分子激活CD4⁺T细胞介导的体液免疫。然而，游离状态的蛋白质或肽抗原经常被迅速清除且免疫原性较差，因此只能产生短暂和较弱的免疫应答。纳米技术为克服这些缺点提供了可能。纳米粒具有许多的优点使得它们适用于抗原递送和疫苗接种，包括有效的抗原包载、保护抗原免受降解、增强DCs对抗原的捕获以及共同递送抗原和免疫刺激佐剂等。

一些成功的疫苗如黄热病疫苗(YF-17D)的研究表明，经由多种Toll样受体(Tolllike receptors,TLRs)有效地激活DCs并增加促炎因子的分泌可以达到免疫系统的有效应答。TLRs是先天性免疫的主要传感器，可以激活一系列的免疫细胞。根据TLRs位置将其细分为两种类型：细胞膜相关受体(TLRs1,2,4,5 和6)，主要识别细菌细胞壁成分；内体相关受体(TLRs3,4,7,8和9)，它们对细菌或病毒核酸特别敏感。已有研究表明使用TLR激动剂作为佐剂能显著增强抗原刺激后的免疫应答并显著改善抗原交叉呈递。最近，对疫苗递送的进一步研究表明了通过组合多个TLRs触发不同信号传导途径以激活协同免疫应答的重要性。

单磷酰脂质A(Monophosphoryl lipid A,MPLA)(位于细胞膜上和内体上的TLR4激动剂)为脂质A的非毒性衍生物，它的毒性比脂多糖(Lipopolysac charide，LPS)的毒性小100至10000倍，且仍具有LPS的许多免疫调节性，能够诱导强烈的Th1-极化免疫应答。作为第一个被批准作为佐剂使用的TLR 激动剂，MPLA已成功用于治疗宫颈癌肝炎和疟疾 (RTS,)等商业疫苗。咪喹莫特(Imiquimod,IMQ)是TLR7激动剂，是一种有前景的DCs激活剂，已被FDA批准为免疫调节剂。IMQ的局部给药在几种皮肤病的治疗中已经显示出了有效性，(IMQ 5％乳膏)已被批准用于治疗浅表性基底细胞癌，光化性角化病和HPV介导的外生殖器和肛周疣。然而，游离的TLRs在体内容易快速降解和清除，因此妨碍其作为疫苗佐剂的临床表现。