[发明专利]一种掌叶覆盆子多糖及其制备方法和在制备肝脏细胞脂毒性损伤抑制剂中的应用

说明书

本发明公开了一种掌叶覆盆子多糖及其制备工艺与应用，该掌叶覆盆子多糖通过超声辅助水提与醇沉工艺制备得到，以摩尔百分比计，该掌叶覆盆子多糖包括以下单糖：半乳糖醛酸40.26～45.20％；阿拉伯糖29.78～33.17％；半乳糖7.63～9.59％；葡萄糖6.38～9.65％；甘露糖1.18～1.31％；鼠李糖3.29～4.89％；葡萄糖醛酸0.98～1.13％；岩藻糖0.27～0.65％。该掌叶覆盆子多糖可显著提升棕榈酸诱导损伤的肝脏细胞的存活率、显著降低棕榈酸诱导产生的细胞ROS水平、有效缓解棕榈酸诱导产生的细胞线粒体膜电位水平降低等效果，因此，可用于制备肝脏细胞脂毒性损伤抑制剂。

技术领域

本发明涉及植物多糖的技术领域，具体涉及一种掌叶覆盆子多糖及其制备方法和在制备肝脏细胞脂毒性损伤抑制剂中的应用。

背景技术

掌叶覆盆子(拉丁名：Rubus chingii Hu)，又称华东覆盆子、大号角公、牛奶母等，蔷薇科悬钩子属植物，分布于江苏、安徽、浙江、江西、福建，等地。未成熟果实可入药，《中国药典》记载其性微温，味甘、酸，入肝肾经，具补肝肾、缩小便、助阳固精，明目之功效，主治阳痿、遗精、虚劳、目暗等症。成熟果实口感细腻，酸甜可口，营养丰富，其富含氨基酸、维生素C、维生素E和维生素B3等成分，具有较高的营养价值和医疗保健作用。现代研究表明，其主要成分有萜类、黄酮等，药理作用主要有抗诱变作用，改善学习记忆能力、延缓衰老，还能增强免疫，对性腺轴有调控作用等(苗菊茹,谢一辉,刘红宁.覆盆子的研究进展[J].江西中医药, 2004,35(1):54-55.)。此外，刘明学等(刘明学,牛靖娥,苏忠伟,等.覆盆子多糖提取，结构分析及自由基清除作用研究[J].食品科技,2009(7): 163-167.)采用体外评价体系发现，覆盆子多糖对氧自由基具有较强清除能力，然而在细胞和体内水平未有相关研究；其在纯化多糖过程中，采用 NaOH和CTAB溶液等方法沉淀多糖，步骤复杂；同时因采用碱法提纯，易破坏多糖的结构，多糖损失较大。

多糖(polysaccharide)是由多个单糖分子缩合、失水而形成的由糖苷键结合的糖链，是一类分子结构复杂且庞大的高分子碳水化合物。多糖组成与结构十分复杂，不是一种纯粹的化学物质，而是聚合程度不同的物质的混合物。多糖是一类具有广泛生物活性的生物大分子，具有多种药理活性，如抗氧化、降血糖、降血脂、抗肿瘤以及增强免疫力等，具有较高的开发价值。如李桂兰(李桂兰.覆盆子多糖的提取及其产品开发[D].南昌大学,2014.)建立了内部沸腾法提取覆盆子多糖的工艺，发现提取温度 80℃、液料比10:1、提取时间10min时覆盆子多糖得率最高。公开号为 CN 107266603 A的中国专利文献中公开了一种具有清除自由基功能的覆盆子多糖类成分提取方法，其通过聚酰胺柱和DEAE—纤维素阴离子柱纯化多糖，然而通过柱纯化的步骤繁杂，且原材料价格昂贵。徐丽萍等(徐丽萍,吴媛媛,王鑫,等.响应曲面法优化红树莓多糖提取工艺[J].中国食品添加剂,2017(9):182-187.)采用响应面法研究料液比、提取温度、提取时间对红树莓(悬钩子属)多糖提取得率的影响，此方法获得的红树莓多糖是混合物，含有多酚、蛋白等杂质。目前，尚未发现高纯度掌叶覆盆子多糖的快速提取方法。

肝脏是人体生物代谢和解毒的重要器官，饱和脂肪酸含量过高会引起肝脏损伤。棕榈酸(Palmitic acid,PA)是人体血液中含量最多的一种游离脂肪酸，同时也是游离脂肪酸中最主要的饱和脂肪酸。棕榈酸广泛用于脂毒性和代谢综合征等体外研究。因此，抑制棕榈酸对肝脏脂毒性损伤的物质具有很大的研究意义。

发明内容

基于上述技术问题，本发明通过超声辅助水提与醇沉工艺制备得到一种组成特殊、高纯度的掌叶覆盆子多糖，该掌叶覆盆子多糖可显著提升棕榈酸诱导损伤的肝脏细胞的存活率、显著降低棕榈酸诱导产生的细胞ROS 水平、有效缓解棕榈酸诱导产生的细胞线粒体膜电位水平降低、有效减少棕榈酸诱导产生的细胞GSH消耗并有效恢复棕榈酸诱导产生的细胞核损伤，因此，可用于制备肝脏细胞脂毒性损伤抑制剂。

具体技术方案如下：