[发明专利]脐动脉内皮细胞在构建造血干细胞微环境中的用途

权利要求书

1.脐动脉内皮细胞在构建造血干细胞微环境中的用途，其特征在于，所述脐动脉内皮细胞是以重组细胞的形式提供的，所述重组细胞携带有E4orf1基因；

所述脐动脉内皮细胞用作饲养层细胞；

所述脐动脉内皮细胞用于维持造血干细胞扩增；

所述脐动脉内皮细胞的血管内皮生长因子受体KDR的表达率为90～95％，内皮细胞标志CD144的表达率均大于99％，内皮细胞标志CD31的表达率为90～95％，干性标志CD117、内皮祖细胞标志CD133以及造血细胞CD45的表达率均低于0.4％。

2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述脐动脉内皮细胞高表达Notch4基因、DLL4基因和Cxcr4基因；

所述重组细胞携带有GFP基因。

3.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述脐动脉内皮细胞携带有GFP基因。

4.一种造血干细胞扩增的方法，其特征在于，包括：

将携带有E4orf1基因的第一载体加入含有所述脐动脉内皮细胞的第一培养基中，进行培养，以便得到所述重组细胞；以及

将造血干细胞接种于含有所述重组细胞的第二培养基中，进行培养，以便使所述造血干细胞扩增；

所述脐动脉内皮细胞用作饲养层细胞；

所述脐动脉内皮细胞用于维持造血干细胞扩增；

所述脐动脉内皮细胞的血管内皮生长因子受体KDR的表达率为90～95％，内皮细胞标志CD144的表达率均大于99％，内皮细胞标志CD31的表达率为90～95％，干性标志CD117、内皮祖细胞标志CD133以及造血细胞CD45的表达率均低于0.4％。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述方法进一步包括：

分别将所述第一载体和携带有GFP基因的第二载体共同加入所述脐动脉内皮细胞的培养基中，

所述第一载体为包装有质粒MSCV-N E4orf1的逆转录病毒，并且所述质粒上携带有抗嘌呤霉素基因，

所述第二载体为包装有质粒pMX-GFP的逆转录病毒，并且所述质粒上携带有抗嘌呤霉素基因；

所述第一载体和第二载体的体积比为1:1；

所述第一培养基包括EGM-2基础培养基和0.5μg/ml的嘌呤霉素，且不含有血清及血管内皮细胞生长因子。

6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述造血干细胞为CD34⁺细胞；

所述第二培养基选自StemSpan培养基，所述StemSpan培养基含有50ng/ml SCF、50ng/ml Flt-3L和50ng/ml TPO，不含有血清及血管内皮细胞生长因子。