[发明专利]一种复合酶增产科罗索酸的方法

说明书

本发明提供了一种复合酶增产复合酶增产科罗索酸的方法，提取过程中采用复合酶增产科罗索酸，采用破壁浸提，细胞破碎充分，提高了提取率，制得的科罗索酸纯度高，最高为98％。

技术领域

本发明涉及药物提取领域，特别涉及一种复合酶增产科罗索酸的方法

背景技术

金莲花，多年生草本，高30-70cm。全株无毛。茎直立，不分枝，疏生2-4叶。基生叶1-1，长16-36cm，有长柄，柄长12-30cm，基部具狭鞘；叶片五角形，长3.8-6.8cm，宽6.8-12.5cm，3全裂，中央全裂片菱形，先端急尖，3裂达中部或稍超过中部，边缘具不等人的三角形税锯齿；例全裂片斜扇形，2深裂近基部，上方深裂片与中央全裂片相似，下方深裂片较小，斜菱形；茎生叶互生，叶形与基生叶相似，生于茎下部的叶具长柄，上部叶较小，具短柄或无柄。花两性，单朵顶生或2-3朵排列成稀疏的聚伞花序，直径3.8-5.5cm；花梗长5-9cm；苞片3裂；萼片通常10-15，金黄色，干时不变绿色，椭圆状卵形或倒卵形，长1.5-2.8cm，宽7-16mm，先端疏生三角形牙齿，间或为3个小裂片，或为不明显的小牙齿；花瓣(蜜叶)18-21，狭线形，稍长于萼片或萼乌片等长，长1.8-2.2cm，宽1.2-1.5mm，无端渐狭，近基部有蜜槽；雄蕊多数，长5-11mm，螺旋状排列，花丝线形，花药在侧面开裂，长3-4mm；心皮20-30。蓇葖果，长1-1.2cm，宽约3mm，具脉网，喙长约1mm。花期6-7月，果期8-9月。金莲花中含科罗索酸，藜芦酸(veratricacid)，荭草甙(orientin)，牡荆甙(vitexin)，黎芦酰胺(veratramide)，棕榈酸(palmiticacid)。科罗索酸(corosolicacid)，2α-羟基熊果酸(2-alpha-hydroxyursolicacid)，

科罗索酸降血糖作用的研究源于对菲律宾、马来西亚等东南亚国家传统降血糖保健饮料原料大叶紫薇叶的研究。1940年，Garcia采用以1～2g大叶紫薇干叶/kg体重的剂量喂养普通家兔，发现每24h家兔的血糖水平平均下降16～49mg/L。1956年，Garcia又采用大叶紫薇叶提取物进行临床实验，发现其具有降低糖尿病病人血糖的效果。1993年，Murakami等从大叶紫薇的叶中分离出2种三萜酸科罗索酸和山楂酸，发现科罗索酸具有降血糖的效果。目前，对科罗索酸降血糖的作用，已从体外细胞实验、体内动物实验和临床实验等方面进行了系统的研究。在体外实验中，1993年，Murakami等以肿瘤细胞进行体外培养，发现大叶紫薇提取物可刺激细胞膜的葡萄糖运输通道，增强细胞对葡萄糖的利用，进而降低血糖含量，此作用与胰岛素降糖作用机理相似。体内动物实验中，1999年，Hamamoto等制备了一种含1％(w/w)科罗索酸的大叶紫薇提取物胶囊，将其喂养小鼠，喂养后90min，小鼠的血糖水平比对照组明显下降。此外，在兔子体内也进行了科罗索酸降糖作用实验。对禁食24h正常的兔子喂食科罗索酸，考察喂食一段时间后血糖含量，结果表明，大剂量服用科罗索酸引起的血糖降低与服用两个单位的胰岛素相似。大剂量服用科罗索酸可以带来57mg/ml的血糖降低。正常兔子口服科罗索酸会带来16～49mg/ml的血糖降低。2个多小时后再次给药会使血糖保持在低水平上，甚至略微有所下降，此过程会保持5个多小时。大剂量服用克罗索酸会带来40～58mg/ml的血糖降低。血糖降低的峰值期出现在服药后2～4h，6～10h后血糖恢复到正常水平。血糖下降明显和科罗索酸摄入量有关。临床实验中，1999年Ikeda等采用含大叶紫薇提取物的胶囊对糖尿病病人进行临床实验，发现其具有治疗糖尿病的作用。William等将含1％(w/w)科罗索酸的大叶紫薇甲醇提取物制备为软胶囊和硬胶囊，对56名II型糖尿病人进行了临床观察，结果表明，每人每天供给剂量32mg和48mg的两组，两周后，他们的血糖水平有明显下降，服用软胶囊组的病人，其血糖水平平均下降30％，服用硬胶囊组的病人，其血糖水平平均下降20％，表明两种胶囊都具有降血糖的效果，且软胶囊的降糖效果优于硬胶囊。将大鼠随机分成正常对照组、模型对照组、大叶紫薇总三萜高剂量组和低剂量组,正常对照组与模型对照组喂服生理盐水,高、低剂量组分别按大鼠体重的0.025％和0.01％喂服大叶紫薇总三萜喂服28d后,测葡萄糖耐量、血糖、尿糖、血脂、体重和糖化血红蛋白以考察大叶紫薇总三萜对糖尿病大鼠的降血糖作用.结果表明:大叶紫薇总三萜能非常显著地改善糖尿病大鼠的葡萄糖耐量,降低糖尿病大鼠的血糖,尿糖,血清TC,TG,LDL-C和糖化血红蛋白,升高HDL-C.因此,大叶紫薇总三萜对糖尿病大鼠有降糖效果。