[发明专利]靶向共载抗原和TLR激动剂的阳离子磷脂-聚合物杂化纳米粒疫苗佐剂及制备方法与应用

权利要求书

1.一种靶向共载抗原和TLR激动剂的阳离子磷脂-聚合物杂化纳米粒疫苗佐剂的制备方法，其特征在于，包括步骤：

将两亲性三嵌段共聚物PCL-b-PEG-b-PCL、阳离子磷脂DOTAP、TLR7激动剂、TLR4激动剂以及DSPE-PEG-NH₂溶于有机溶剂中，然后旋转蒸发除去有机溶剂，在瓶壁形成一层均匀薄膜，用氮气吹干残余溶剂后干燥；

在干燥后的产物中加入溶剂进行水化，震荡混匀，然后在冰浴条件下超声形成稳定乳液，将所述稳定乳液过滤，收集滤液，得到负载TLR激动剂的阳离子磷脂-聚合物杂化纳米粒溶液；

在三乙胺的催化下，将所述负载TLR激动剂的阳离子磷脂-聚合物杂化纳米粒溶液和甘露糖水溶液混合后搅拌预设时间，再将搅拌后的所述负载TLR激动剂的阳离子磷脂-聚合物杂化纳米粒溶液和抗原溶液混合后孵育，得到所述靶向共载抗原和TLR激动剂的阳离子磷脂-聚合物杂化纳米粒疫苗佐剂；

所述TLR7激动剂为IMQ和/或R848，所述TLR4激动剂为MPLA；

所述有机溶剂为二氯甲烷；

所述抗原溶液中的抗原为卵清蛋白；

所述溶剂为水或PBS溶液，所述水为双蒸水；

所述两亲性三嵌段共聚物PCL-b-PEG-b-PCL的分子量为10000-24000，PEG亲水链段质量百分数大于45％。

2.根据权利要求1所述的靶向共载抗原和TLR激动剂的阳离子磷脂-聚合物杂化纳米粒疫苗佐剂的制备方法，其特征在于：

所述两亲性三嵌段共聚物PCL-b-PEG-b-PCL与所述DSPE-PEG-NH₂的质量比为20mg：(0.2-1)mg。

3.根据权利要求1所述的靶向共载抗原和TLR激动剂的阳离子磷脂-聚合物杂化纳米粒疫苗佐剂的制备方法，其特征在于：

所述甘露糖水溶液的质量分数为0.25％。

4.根据权利要求1所述的靶向共载抗原和TLR激动剂的阳离子磷脂-聚合物杂化纳米粒疫苗佐剂的制备方法，其特征在于：

所述搅拌的时间为2-4h。

5.根据权利要求1所述的靶向共载抗原和TLR激动剂的阳离子磷脂-聚合物杂化纳米粒疫苗佐剂的制备方法，其特征在于：

所述两亲性三嵌段共聚物PCL-b-PEG-b-PCL与所述阳离子磷脂DOTAP的质量比为20mg：(0.5-2)mg；

所述两亲性三嵌段共聚物PCL-b-PEG-b-PCL与所述TLR7激动剂的质量比为20mg：(50-200)μg；

所述两亲性三嵌段共聚物PCL-b-PEG-b-PCL与所述TLR4激动剂的质量比为20mg：(5-20)μg。

6.根据权利要求1所述的靶向共载抗原和TLR激动剂的阳离子磷脂-聚合物杂化纳米粒疫苗佐剂的制备方法，其特征在于：

所述干燥为真空干燥，所述干燥的时间为12-24h。

7.根据权利要求1所述的靶向共载抗原和TLR激动剂的阳离子磷脂-聚合物杂化纳米粒疫苗佐剂的制备方法，其特征在于：

所述溶剂的体积和所述两亲性三嵌段共聚物PCL-b-PEG-b-PCL的质量的比值为(2-10)mL：20mg；

所述水化的温度为65℃，所述水化的时间为2-12h，所述超声的时间为5-35min，所述过滤采用的是0.45μm滤膜。

8.根据权利要求1所述的靶向共载抗原和TLR激动剂的阳离子磷脂-聚合物杂化纳米粒疫苗佐剂的制备方法，其特征在于：

所述抗原溶液中抗原的浓度为1mg/mL，所述抗原和所述两亲性三嵌段共聚物PCL-b-PEG-b-PCL的质量比为(1-3)mg：20mg；

所述孵育的温度为4℃，所述孵育的时间为0.5-3h，孵育过程伴随缓慢震荡。