[发明专利]一株产二甲氧基异苯并呋喃-1-酮的真菌及其制备二甲氧基异苯并呋喃-1-酮的方法

权利要求书

1.一株产二甲氧基异苯并呋喃-1-酮的真菌，其为糙皮侧耳（Pleurotus ostreatus）mf-03，保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏编号为保藏号为CGMCC NO.15875。

2.用权利要求1所述菌株制备二甲氧基异苯并呋喃-1-酮的方法，其特征在于该制备方法按以下步骤进行：

步骤一、大米固体培养基接种糙皮侧耳mf-03避光静置固态发酵；所述大米固体培养基按大米80 g和120 ml营养液的比例组成，然后在120 ℃灭菌20 min制成；其中每升营养液由0.05 g FeSO₄·7H₂O、1 g MgSO₄·7H₂O、1 g KH₂PO₄、2g NaNO₃、1 g 甘油、2 g 酵母浸粉和余量的蒸馏水组成；

步骤二、将长满菌丝的大米用乙酸乙酯萃取三次，然后用旋转蒸发仪将萃取液旋干，获得提取物浸膏，再利用层析分离纯化代谢产物，之后用制备型HPLC获得两种二甲氧基异苯并呋喃-1-酮，分别为4,6-二甲氧基异苯并呋喃-1-酮与5,7-二甲氧基异苯并呋喃-1-酮；

上述步骤二中采用正向硅胶柱层析；层析柱内加入200~300目硅胶、填实，上样量为20~30倍，上样前样品和100~200目硅胶按质量比1:1的均匀搅拌，干法上样；洗脱溶剂为二氯甲烷；二氯甲烷洗脱15个柱体积；合并第2个至第9个柱体积层析液，作为组分1；合并第10个至13个柱体积层析液，作为组分2；

步骤二收集的所述组分1，减压浓缩，挥干溶剂，重结晶纯化；然后将其溶解，进行Sephadex LH-20层析，洗脱液为甲醇氯仿1:1混合液，等度洗脱，收集易结晶组分，经HPLC检测合并相似组分，再经制备型HPLC，洗脱液为80:20甲醇水混合液，等度洗脱，流速2.5 ml/min，保留时间18 min，制备得到4,6-二甲氧基异苯并呋喃-1-酮；

步骤二中收集的所述组分2，减压浓缩，挥干溶剂；然后将其溶解，进行Sephadex LH-20层析，洗脱液为甲醇氯仿1:1混合液，等度洗脱，收集白色粉末组，洗脱液为80:20甲醇水混合液，等度洗脱，流速2.5 ml/min，保留时间15.5 min，制备得到5,7-二甲氧基异苯并呋喃-1-酮；

其中，所述制备型HPLC为5 µm粒径的10 × 250 mm的C18柱。

3.根据权利要求2所述的制备二甲氧基异苯并呋喃-1-酮的方法，其特征在于步骤一中大米固体培养基每80 g大米接种糙皮侧耳mf-03种子液10 ml。

4.根据权利要求3所述的制备二甲氧基异苯并呋喃-1-酮的方法，其特征在于挑取糙皮侧耳mf-03边长为3mm的菌落块5个放入装有10 ml PD培养基的三角瓶中，封口摇床25℃、150 rpm条件下培养5天，得到糙皮侧耳mf-03无性菌丝种子液。

5.根据权利要求2所述的制备二甲氧基异苯并呋喃-1-酮的方法，其特征在于步骤一中接种糙皮侧耳mf-03后置于25℃避光环境静置发酵15天。