[发明专利]检测EGFR基因21外显子基因突变的试剂盒及方法在审
| 申请号： | 201810895667.0 | 申请日： | 2018-08-08 |
| 公开（公告）号： | CN108998526A | 公开（公告）日： | 2018-12-14 |
| 发明（设计）人： | 蒋析文;朱小亚;刘悦;颜尔聪 | 申请（专利权）人： | 中山大学达安基因股份有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6886 | 分类号： | C12Q1/6886;C12N15/11 |
| 代理公司： | 上海助之鑫知识产权代理有限公司 31328 | 代理人： | 陈详 |
| 地址： | 510665 广东省*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 试剂盒 基因突变 外显子 种检测 引物探针混合液 非小细胞肺癌 患者血液 突变类型 游离核酸 数字PCR 灵敏度 探针 引物 突变 样本 检测 优化 | ||
1.一种用于数字PCR检测EGFR基因21外显子突变的引物对，其特征在于，所述引物对包括上游引物和下游引物；其中，所述上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.:1所示，所述下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.:2所示。
2.一种用于数字PCR检测EGFR基因21外显子突变的突变探针，其特征在于，所述突变探针的核苷酸序列如SEQ ID NO.:3所示。
3.如权利要求2所述的突变探针，其特征在于，所述突变探针的5’端包含有荧光报告基团FAM；和/或，所述突变探针的3’端包含有荧光淬灭基团MGB。
4.一种用于数字PCR检测EGFR基因21外显子突变的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1所述的引物对。
5.如权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括权利要求2所述的突变探针。
6.如权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括野生探针，所述野生探针特异性结合野生型EGFR基因21外显子目标序列；优选地，所述野生探针的5’端标记有VIC荧光报告基团，和/或，所述野生探针的3’端标记有MGB荧光淬灭基团；更优选地，所述野生探针的核苷酸序列如SEQ ID NO.:4所示。
7.如权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括阳性对照，和/或阴性对照；和/或
所述试剂盒还包括数字PCR反应酶；和/或数字PCR用缓冲液。
8.一种数字PCR检测EGFR基因21外显子突变的方法，其特征在于，所述方法包括步骤：
(1)提供待检测对象的DNA样本；
(2)制备数字PCR反应体系并进行数字PCR检测：
其中，所述数字PCR反应体系包括步骤(1)提供的所述DNA样本、权利要求1所述的引物对、和权利要求2所述的突变探针。
9.如权利要求8所述的方法，其特征在于，所述数字PCR反应体系还包括野生探针，所述野生探针特异性结合野生型EGFR基因21外显子目标序列；优选地，所述野生探针的5’端标记有VIC荧光报告基团，和/或，所述野生探针的3’端标记有MGB荧光淬灭基团；更优选地，所述野生探针的核苷酸序列如SEQ ID NO.:4所示。
10.如权利要求1所述的引物对、和/或权利要求2所述的突变探针的用途，其特征在于，用于制备数字PCR检测试剂盒，所述数字PCR检测试剂盒用于检测EGFR基因第21外显子基因突变。
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