[发明专利]一种阳春砂根状茎芽的愈伤组织的诱导方法

说明书

本发明提供了一种阳春砂根状茎芽的愈伤组织的诱导方法，以阳春砂的根状茎芽为外植体，经过灭菌、接种及诱导培养，得到其愈伤组织，所述诱导培养的诱导培养基为MS+0.5～2.5mg/L 6‑BA+0.1～2mg/L 2,4‑D+0.05～2mg/L NAA，培养环境的光照时间为10h，光照强度为2000Lx，培养温度为25℃。本发明使用阳春砂的根状茎芽为外植体，采用无性繁殖能保留亲本的完整药性，不易产生变异，从而使得药性稳定，能保证药物治疗的效果，而且外植体材料的获取也很容易，可随时取材进行繁殖培养。

技术领域

本发明涉及一种愈伤组织的诱导方法，属于组织培养技术领域。

背景技术

阳春砂(Amomum villosum Lour.)是姜科豆蔻属(Amomum Roxb.)多年生常绿草本植物，以干燥成熟的果实入药，又称为“春砂仁”，是我国著名的四大南药之一，有着1300多年的应用历史。春砂仁性温，味辛，具有化湿开胃、温脾止泻、理气安胎等功效。阳春砂主要分布于广东、广西、云南等地，其中以广东阳春所产的砂仁药效最佳。砂仁的需求量较大，每年的需求量估计超过2.2×10⁶kg，由于阳春砂存在落果率高、产量低等问题，导致春砂仁的产量远远不能满足市场的需求，严重阻碍了春砂仁产业的发展。此外，传统的育种方法需要花费大量的人力、物力和时间，也没法改变当前阳春砂单位产量低的现状。因此，依靠科学技术培育高产优质的种源，提高当前阳春砂的产量，是当前亟不可待的研究工作。组织培养研究，是培育高产优质阳春砂种源的前期工作。

植物组织培养又叫离体培养，是指通过无菌操作把植物体的离体器官、组织、细胞甚至原生质体，在人为提供及控制的环境条件下生长和发育的所有组织培养技术的总称。通过组织培养技术，能在短时间内有效的扩大繁殖系数，从而获得大量、一致的试管苗，从而克服传统育种的缺陷。目前关于阳春砂组织培养的研究，主要有两类，一类是以阳春砂根状茎芽或生长点为外植体进行离体扩繁，没有经过愈伤组织诱导过程；另一类是以种子或种子萌发的无菌幼苗作为外植体进行愈伤组织诱导和再生。前一类工作因为没有经过愈伤组织诱导，其繁殖系数较低，且无法应用愈伤组织进行基因转化等进一步的研究。后一类工作因为用种子或种子萌发苗为外植体，而种子的获得受季节的限制，使用时间有限。

发明内容

为此，本发明以阳春砂大田植株根状茎芽为外植体材料，进行愈伤组织的诱导，建立阳春砂愈伤组织诱导体系，获得愈伤组织，再经组织培养扩大阳春砂繁殖。阳春砂大田植株根状茎芽数量多、容易获得，因此本发明不受时间的限制。

本发明的目的在于提供一种通过组织培养手段培养出阳春砂根状茎芽的愈伤组织，为分化为阳春砂完整植株提供基础。

本发明是通过如下技术方案实现的：

一种阳春砂根状茎芽的愈伤组织的诱导方法，以阳春砂根状茎芽作为外植体，经过灭菌、接种、及诱导培养，得到阳春砂根状茎芽愈伤组织；所述的诱导培养使用的诱导培养基为MS+0.5～2.5mg/L 6-BA+0.1～2.0mg/L 2,4-D+0.05～2.0mg/L NAA。即：在每一升的MS培养基(配制方法见表1)中添加0.5～2.5mg/L 6-BA、0.1～2.0mg/L 2,4-D和0.05～2.0mg/L NAA。

表1：MS培养基母液配制方法

上述的MS为MS培养基，BA为6-苄氨基腺嘌呤，2,4-D为2,4-二氯苯氧乙酸，NAA为萘乙酸。

优选地，所述诱导培养基为MS+1.0～2.0mg/L6-BA+0.5～1.5mg/L 2,4-D+0.1～1.0mg/L NAA。

优选地，所述诱导培养基为MS+1.5mg/L6-BA+1.0mg/L2,4-D+0.5mg/L NAA。