[发明专利]联合两种单链抗体的双特异性嵌合抗原受体及表达载体

说明书

本发明提供了一种联合两种单链抗体的双特异性嵌合抗原受体、编码基因、联合表达载体、制备重组慢病毒的方法、制备联合两种单链抗体的双特异性嵌合抗原受体基因修饰的CD3+T的方法以及基因修饰的CD3+T细胞的用途，联合两种单链抗体的双特异性嵌合抗原受体包括：联合两种单链抗体的双特异性嵌合抗原受体包括CD8信号肽、由两个不同单链抗体构成的抗原结合结构域、跨膜结构域和胞内信号传导结构域。应用本发明实施例提供的技术方案，实现了对CD19靶点丢失复发患者和浆细胞肿瘤患者的治疗，为肿瘤疾病提供更加有效的治疗途径。

技术领域

本发明涉及生物医学领域，尤其涉及一种联合两种单链抗体的双特异性嵌合抗原受体、编码基因、联合表达载体、制备重组慢病毒的方法、制备联合两种单链抗体的双特异性嵌合抗原受体基因修饰的CD3+T的方法以及基因修饰的CD3+T细胞的用途。

背景技术

肿瘤免疫治疗

肿瘤免疫治疗的理论基础是免疫系统具有识别肿瘤相关抗原、调控机体攻击肿瘤细胞(高度特异性的细胞溶解)的能力。这个生物过程十分复杂，目前仍处于研究之中。上世纪90年代，多个科研小组已经发现了肿瘤抗原(tumor antigens)，T淋巴细胞可以通过主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex，MHC)依赖性方式识别这些肿瘤抗原。

肿瘤免疫治疗通常分为两类，非特异性免疫和特异性免疫。非特异性免疫治疗主要包括白细胞介素-2(interleukin-2，IL-2)，干扰素α(interferonα，IFN-α)，肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor，TNF-α)，卡介苗等细胞因子和毒素，过继性细胞免疫治疗等。特异性免疫治疗主要是肿瘤疫苗。

肿瘤非特异性免疫治疗

非特异性免疫应答是与生俱来的，它的形成并不需要抗原刺激，能广泛地针对多种抗原，是免疫应答的基础，但特异性不强，对某种特定抗原物质往往不能产生足够强度的非特异性免疫反应。在进入临床试验的多种细胞因子中，白细胞介素-2和干扰素应用最为广泛[Rosenberg S A，Lotze M T，Muul L M，et al.A progress report on thetreatment of 157 patients with advanced cancer using lymphokine-activatedkiller cells and interleukin-2 or high-dose interleukin-2 alone[J].N Engl JMed，1987，316(15):889－897]。

肿瘤单克隆抗体的免疫治疗

近20多年来单克隆抗体已在肿瘤治疗领域得到广泛应用。抗肿瘤单抗药物一般包括两类：一是抗肿瘤单抗，二是抗肿瘤单抗偶联物，或称免疫偶联物。免疫偶联物分子由单抗与“弹头”药物两部分组成，“弹头”主要包括放射性核素、药物和毒素，与单抗连接后分别构成放射免疫偶联物、化学免疫偶联物和免疫毒素。在1997年11月和1998年10月美国FDA分别通过了用于临床肿瘤治疗的两个单抗：Rituximab(rituxan)和Trastuzumab(herceptin)[Dillman R O.Magic bullets at last！Finally—approval of a monoclonal antibodyfor the treatment of cancer[J].Cancer Biother Radiopharm，1997，12:223－225.]。目前认为单抗的作用机制有阻断作用、信号传导作用以及靶向作用等三种作用机制，没有直接的杀伤作用。另外还存在药理学方面的问题，主要是到达肿瘤的药量不足。由于偶联物是异体蛋白，会被网状内皮系统摄取，有相当数量将积聚于肝、脾和骨髓。偶联物是大分子物质，通过毛细血管内皮层及穿透肿瘤细胞外间隙均受到限制。

肿瘤的过继免疫治疗