[发明专利]三重荧光PCR测西藏环状病毒、云南环状病毒及萨斯乌瓦扎利环状病毒的引物探针组及试剂盒

说明书

本发明公开了一种三重荧光PCR法联合检测西藏环状病毒、云南环状病毒及萨斯乌瓦扎利环状病毒的引物探针组，针对西藏环状病毒的正向引物序列如SEQ ID No.1所示，针对西藏环状病毒的反向引物序列如SEQ ID No.2所示，针对云南环状病毒的正向引物序列如SEQ ID No.3所示，针对云南环状病毒的反向引物序列如SEQ ID No.4所示；针对萨斯乌瓦扎利环状病毒的正向引物序列如SEQ ID No.5所示，针对萨斯乌瓦扎利环状病毒的反向引物序列如SEQ ID No.6所示。本发明引物探针组及试剂盒可以对西藏环状病毒、云南环状病毒及萨斯乌瓦扎利环状病毒进行检测，检测灵敏度达1×10³copies/ml，有效克服现有技术中对西藏环状病毒、云南环状病毒及萨斯乌瓦扎利环状病毒检测的缺失，具高度产业利用价值。

技术领域

本发明涉及一种联合检测西藏环状病毒、云南环状病毒及萨斯乌瓦扎利环状病毒的引物探针组及试剂盒，特别是涉及一种基于三重荧光PCR法联合检测西藏环状病毒、云南环状病毒及萨斯乌瓦扎利环状病毒的引物探针组、试剂盒及其使用方法。

背景技术

虫媒病毒种类繁多，共分布在病毒分类中的个病毒科，其中与人、畜疾病最密切相关的种类主要集中在黄病毒科、布尼亚病毒科、披膜病毒科甲病毒属和呼肠孤病毒科。以往大多数虫媒病毒仅分布于某个地区或洲，但随着近年来的社会、经济发展，人类之间的交流和互动频繁、不断开发森林等原始资源、迅速城市化扩展等因素都促进了虫媒病毒的传播和扩散，因而一些局部流行的虫媒病毒病出现了跨地区，甚至跨洲的传播和暴发流行。

环状病毒属(the genus Orbivirus)在分类上属于呼肠病毒科(the familyReoviridae)，目前含22个病毒种，其中一些种能够感染引起部分动物发病，例如蓝舌病毒(Bluetongue virus)、非洲马病毒(African horse sickness virus)和非洲出血热病毒(Epizootic hemorrhagic disease virus)，传播媒介主要为蜢、蜱、蚊及蝇类，但尚无在人类中引起过爆发疫情。近年来新分离发现一些较为少见环状病毒属的种包括西藏环状病毒(Tibet Obivirus,TIBOV)、云南环状病毒(Yunnan Obivirus,YUOV)及萨斯乌瓦扎利环状病毒(Sathuvachari virus,SVIV)。西藏环状病毒在西藏自治区人口稀少的西南部采集的蜱、及多斑按蚊鼠和鸟的脑标本中分离到，该病毒能够导致细胞天发生剧烈病变(圆、碎)，不能导致细胞病变，但可以在该细胞中增殖，血清学调查的研究证实当地的率达到26％，而在对当地采集的猪血清标本检测中，抗体阳性率为14％，提示该病毒已经在当地建立传播循环。云南环状病毒首次在我国的三带喙库蚊(Culex tritaeniorhynchus)中分离到，该病毒能够在蚊媒细胞中传代，但不能再哺乳动物细胞系中复制，而感染乳鼠后却可以引起非致死性的，无症状感染状态及病毒血症，可诱导机体产生抗体，因而存在隐蔽传播的可能性。萨斯乌瓦扎利环状病毒首次在印度的鸟类(Brahminy myna)中分离到，遗传进化分析证实该病毒与蚊媒传播环状病毒亲缘关系较近，推测应该可以在多种蚊媒及鸟类中传播，但在人及其它动物中感染的情况未知。综合上述信息，这些环状病毒之间存在一定的差异，但遗传分析显示他们均为蚊媒传播的环状病毒，推测这些病毒在病毒分离地的健康人群及家养动物中存在一定的感染率，提示当地可能存在环状病毒的自然循环。

环状病毒属的西藏环状病毒(Tibet Obivirus,TIBOV)、云南环状病毒(YunnanObivirus,YUOV)及萨斯乌瓦扎利环状病毒(Sathuvachari virus,SVIV)虽然没有在人及其它动物中爆发的报道，但在我国及邻国的媒介中分离到，在一些人群及动物中检测到病毒相应的病毒抗体，因而，我们应当加强环状病毒感染情况的检测及调查，研究这些病毒的主要储存宿舍和传播途径等信息，以明确该病毒的致病性、评估其对我国公共卫生的可能预期影响。目前针对三种病毒，既无血清学也无核酸相关检测试剂，因而，我们有必要开发相应的快速诊断试剂，应对可应急检测需求。