[发明专利]一种侵袭性真菌感染的检测方法、检测试剂盒、及应用

权利要求书

1.一种用于检测侵袭性真菌感染的真菌属特异性巢式 PCR引物以及真菌种特异检测荧光探针组合，其特征在于，所述真菌为真菌白色念珠菌Candida albicans、热带假丝酵母Candida tropicalis、近平滑假丝酵母Candida parapsilosis组合；

其中，所述真菌属特异性巢式 PCR引物包括如下序列的引物组合：

上游引物1，5’-3’序列：TGAAGAACGCAGCGAAAT（SEQ ID NO.1）；

下游引物1，5’-3’序列：ATATGCTTAAGTTCAGCG（SEQ ID NO.2）；

上游引物1-1，5’-3’序列：CATGCCTGTTTGAGCG（SEQ ID NO.3）；

下游引物1-2，5’-3’序列：GTCCTACCTGATTTGAGG（SEQ ID NO.4）；

相对应地，所述真菌种特异检测荧光探针为如下序列的组合：

白色念珠菌Candida albicans5’-3’序列： TACCGCCGCAAGCAAT（SEQ ID NO.5）；

热带假丝酵母Candida tropicalis5’-3’序列： TGAAATAAATTGTGGTGGCC（SEQ IDNO.6）；

近平滑假丝酵母Candida parapsilosis5’-3’序列： TGGAGTTTGTACCAATGAGT（SEQ IDNO.7）；

和/或，

所述真菌为克柔念珠菌Candida krusei、光滑念珠菌Candida glabrata、烟曲霉Aspergillus fumigtus组合；其中，所述真菌属特异性巢式 PCR引物包括如下序列的引物组合；

上游引物1，5’-3’序列：TGAAGAACGCAGCGAAAT（SEQ ID NO.1）；

下游引物1，5’-3’序列：ATATGCTTAAGTTCAGCG（SEQ ID NO.2）；

上游引物1-1，5’-3’序列：CATGCCTGTTTGAGCG（SEQ ID NO.3）；

下游引物2-2，5’-3’序列：TTCCTACCTGATTTGAGG（SEQ ID NO.8）；

下游引物2-3，5’-3’序列：CCCTACCTGATTTGAGG（SEQ ID NO.9）；

上游引物2-4，5’-3’序列：TCCCTACCTGATCCGAGG（SEQ ID NO.10）；

下游引物2-5，5’-3’序列：CATGCCTGTCCGAGCGT（SEQ ID NO.11）；

相对应地，所述真菌种特异检测荧光探针为如下序列的组合：

克柔念珠菌Candida krusei 5’-3’序列：CGTGCGCAGAGTTGGG（SEQ ID NO.12）；

光滑念珠菌Candida glabrata 5’-3’序列：TGTCTGCCCAGCACGCA（SEQ ID NO.13）；

烟曲霉Aspergillus fumigtus5’-3’序列：CCTACAGAGCAGGTGACAAAG（SEQ ID NO.14）。

2.如权利要求1所述用于检测侵袭性真菌感染的真菌属特异性巢式 PCR引物以及真菌种特异检测荧光探针组合，其特征在于，进一步包括两端经化学修饰的真菌种特异检测荧光探针；所述化学修饰包括：5'端：采用FAM、HEX、VIC、JOE、TAMRA、Cy3、NED、ROX、TEXAS-Red、Cy5荧光染料基团中任意三种染料的组合的化学修饰；和，3'端：采用BHQ1或BHQ2或3IABkFQ或3IAbRQSp淬灭基团的化学修饰。

3.一种用于检测侵袭性真菌感染的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括如权利要求1所述的真菌属特异性巢式 PCR引物以及真菌种特异检测荧光探针组合。