[发明专利]一种生物合成根皮素的分离提纯工艺

说明书

本发明涉及一种生物合成根皮素的分离提纯工艺，包含以下步骤：取菌液，加入等体积的纯乙醇萃取，利用超声波辅助使其充分萃取，得混合液；上述混合液，利用离心机对其进行离心操作，收集上清液部分减压浓缩，浓缩液上大孔树脂柱，水洗至无色透明，用2‑3倍柱体积30％～100％的乙醇洗脱有效成分；上述洗脱液浓缩沉淀，趁热过滤，滤出固体；固体用体积分数95～99％的乙醇重结晶2‑3次，结晶物干燥即得产品。本发明采用的原料来自本公司通过发酵产生根皮素的酵母菌发酵液，增加了提取根皮素的原料种类的选择，开发了一种针对酵母菌发酵液的根皮素提取工艺，本发明符合绿色生产的理念，对设备的要求较低，操作简单，无毒无害，提取率可以达到90％以上，根皮素的纯度达到96％以上。

技术领域

本发明涉及一种生物合成根皮素的分离提纯工艺，特别是涉及一种利用酵母菌合成根皮素并且使用大孔树脂分离提纯根皮素的工艺。-

背景技术

根皮素是国内外最新研究开发的的一种天然皮肤美白剂，根皮素能抑制皮脂腺的过度分泌，用于治疗分泌旺盛型粉刺；能抑制黑色素细胞活性，对各种皮肤色斑有作用。与同类天然成分熊果苷和曲酸相比，同等体积分数的根皮素对酪氨酸酶的抑制作用要好于它们，并且当其与熊果苷和/或曲酸进行复配时，能大大提高产品对酪氨酸酶的抑制率，使抑制率达到100％。

酵母是基因克隆实验中常用的真核生物宿主细胞，酵母克隆载体的种类也很多。酵母菌表达质粒长2pm，称为2μm质粒，约6300bp，这种质粒至少有一段时间存在于细胞核内染色体以外，利用2pm质粒和大肠杆菌中的质粒可以构建成能穿梭于细菌与酵母菌细胞之间的穿梭质粒，酵母克隆载体大部分是在这个基础上构建的。

目前国内的根皮素分离提纯工艺都是以植物提取或化学合成的根皮素作为主要原料，这两个途径制得的根皮素也可以达到很高的纯度，但是过程复杂，并且需要大量的有机试剂进行催化，对环境造成一定污染，就植物提取而言，操作过于复杂。

经过对现有技术的检索发现，中国专利文献号CN101811949A，公开日2010.08.25，记载了一种“根皮素粉剂的提纯方法”，该技术包括如下步骤：将荔枝壳与乙醇溶液混合提纯后得到粗提液，经浓缩处理后进行离子交换树脂分离，最后通过大孔树脂分离，得到根皮素粉剂。本发明相较于该技术而言，对于原料的选择更具新颖性，原料中根皮素纯度更高，对环境更友好，更有利于今后长久的发展。

酵母菌作为一种常见的单细胞真菌，价格低廉，利用其产生根皮素并且进行分离提纯，符合绿色生产的理念，对设备的要求较低，操作简单，无毒无害，并且得到纯度较高的根皮素。

发明内容

本发明针对现有技术存在的不足，以及选用原料的单一性，公开一种生物合成根皮素的分离提纯工艺，增加了提取根皮素的原料种类的选择，开发了一种新的根皮素提取工艺，本发明符合绿色生产的理念，对设备的要求较低，操作简单，无毒无害，并且可以使根皮素达到很高的纯度。

本发明的目的是通过以下技术解决方案来实现的：

本发明是以经过发酵产生根皮素的酵母菌菌液为原料，通过利用等体积的纯乙醇对菌液进行萃取，萃取液通过离心机进行离心操作，上清液通过减压浓缩处理，再经大孔树脂进行富集纯化，乙醇洗脱，将洗脱液浓缩沉淀，沉淀物利用乙醇重结晶，干燥得产品。

所述的酵母菌菌液，来自本公司自行研发的一种可以通过发酵产生根皮素的酵母菌菌株的发酵液。

所述的纯乙醇的体积分数为99％及以上。

所述的萃取是指：将与菌液体积相同的体积分数在99％及以上的乙醇与菌液混合，利用超声波清辅助使其充分混合，得混合液。

所述的离心是指：利用离心机对其进行离心操作，分离混合液以及破碎死亡的细胞，取上清液待用。

离心转速为5000-8000rpm，时间3-5min，浓缩液上柱速率为0.5-0.8mL/min，浓缩液的上柱量为2-3倍柱体积。