[发明专利]一种基于高效液相色谱法的丙酸含量测定方法

权利要求书

1.一种基于高效液相色谱法的丙酸含量测定方法，其特征在于，具体包括以下步骤：

步骤1仪器和用品的准备；

准备高效液相色谱仪、低速离心机、超声波清洗器、溶剂抽滤装置、0.45μm水系滤膜、0.45μm有机系滤膜、50个0.22μm水系针头式过滤器、可调式移液器、50个2mL样品瓶和超纯水；

所述高效液相色谱仪包括色谱柱以及示差折光检测器；

步骤2试剂的配制；

1）试剂一：超纯水；

2）试剂二：0.5mg丙酸标准品置于1.5 mL EP管中，2-8℃保存；

步骤3流动相的配制；

量取80μL浓硫酸缓慢加入600mL水中；

步骤4丙酸的提取；

液体样本：取0.2mL样本，过0.45μm水系滤膜，上高效液相色谱仪检测；

组织样本：取0.2g样本，加入1mL水，研磨成浆；超声提取30min；离心10min，提取上清液；残渣用0.2mL试剂一超声20min，离心10min，合并两次上清液，用试剂一定容至1.5mL；取适量定容后的溶液用针头式过滤器过滤于带有内衬管的样品瓶内待测；

步骤5标准品的配制：

在试剂二中加入1mL超纯水，配成500μg /mL母液，将所述母液用超纯水分别稀释成100μg/mL、50μg/mL、25μg/mL、10μg/mL和5μg/mL的丙酸标准品溶液；不同浓度的所述丙酸标准品溶液均按照上述操作步骤，取适量上高效液相色谱仪检测；

步骤6 仪器的调试和预设；

1）开启电脑、泵和示差折光检测器，打开软件，在方法组中设置进样量、流速、走样时间，设置完毕保存方法组；

2）先不接入色谱柱，用超纯水冲洗色谱柱以及整套高效液相色谱仪的所有管路；

3）用所述流动相冲洗色谱柱以及整套高效液相色谱仪的所有管路；

4）将流速调低，再接入色谱柱，同时设置柱温，待温度达到后，将流速升高；待基线平稳后，可进行加样；

步骤7样本的测定；

1）在高效液相色谱仪中分别加入不同浓度的所述丙酸标准品溶液10μL，利用示差折光检测器计算不同浓度的所述丙酸标准品溶液的峰面积；

2）在上述高效液相色谱仪中加入样品10μL，利用示差折光检测器在丙酸相应的保留时间处检测丙酸的峰面积；

步骤8 丙酸含量的计算；

以所述丙酸标准品溶液浓度为横坐标，所述丙酸标准品溶液的峰面积为纵坐标计算丙酸标准曲线；将样品峰面积代入所述丙酸标准曲线，计算样品中丙酸含量。

2.根据权利要求1所述的基于高效液相色谱法的丙酸含量测定方法，其特征在于：所述色谱柱为Carbomix H-NP10,8%色谱柱。

3.根据权利要求1所述的基于高效液相色谱法的丙酸含量测定方法，其特征在于：步骤4中，离心样本时所采用的离心率为1000g。

4.根据权利要求1所述的基于高效液相色谱法的丙酸含量测定方法，其特征在于：步骤6的1）中，所述方法组中设置的进样量为10μL，流速为0.6mL/min，走样时间为30min。

5.根据权利要求1所述的基于高效液相色谱法的丙酸含量测定方法，其特征在于：步骤6的2）中，用超纯水冲洗仪器的时间为10min，流速为0.5mL/min。

6.根据权利要求1所述的基于高效液相色谱法的丙酸含量测定方法，其特征在于：步骤6的3）中，用所述流动相冲洗色谱柱的时间10min，流速为0.5 mL/min。

7.根据权利要求1所述的基于高效液相色谱法的丙酸含量测定方法，其特征在于：步骤6的4）中，先将流速调低至0.1 mL/min，在接入色谱柱后将柱温设置为80℃，待温度达到后，再将流速升高至0.6 mL/min。

8.根据权利要求1所述的基于高效液相色谱法的丙酸含量测定方法，其特征在于：步骤7的2）中，所述的丙酸保留时间为16.2min。