[发明专利]一种抗乳腺癌药物的高通量筛选方法

说明书

本发明提供了一种抗乳腺癌药物的高通量筛选方法，与以往方法不同，可为癌症患者提供精准个体化治疗选药。本发明通过控制肿瘤细胞培养液中两性霉素B和所述庆大霉素的浓度，可以提高肿瘤细胞的成活率，有效维持细胞形态促进肿瘤细胞对营养物质的吸收。通过控制肿瘤细胞培养液中胰岛素与生长因子EGF的浓度，可以提高肿瘤细胞的生长速率，并提高细胞活性，可以得到大量的高活性肿瘤细胞，同时使用该比例的胰岛素和生长因子可以降低胎牛血清的使用量，由于胎牛血清价格比较昂贵，使用量减少有利于节约资源，并且使用本发明培养的细胞用于药物筛选测定的用药的半数抑制浓度(IC50)误差小，可以减少检测次数。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种抗乳腺癌药物的高通量筛选方法。

背景技术

乳腺癌是中国妇女最常见的恶性肿瘤，发病率高，严重威胁着妇女的健康。乳腺癌是一种全身性疾病，即使早期也有少量的乳腺癌细胞转移到身体其它器官，据资料统计，发病率占全身各种恶性肿瘤的7-10％，″三阴乳腺癌乳腺癌″特指雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)及人表皮生长因子受体2(HER-2)均阴性的乳腺癌患者，占乳腺癌15-20％，其特点是复发性高，转移早和预后差等临床特点，目前其主要治疗包括局部治疗(手术和放疗)和全身治疗(化疗)为主。但由于肿瘤的异质性很高，其疗效和预后一直欠佳，FDA和CFDA尚未有推荐的靶向药物用于三阴性乳腺癌的辅助治疗，新辅助治疗或者解救治疗。但仍有一些靶向药物和免疫药物正在进行和III期临床试验。我们应用ROHS高通个体化用药筛选，重编程类器官高通量药物筛选ROHS(Reprogramed organoid Based High-throughputscreening，是用特殊方法将患者自己的肿瘤细胞从肿瘤组织中分离出来，在实验室保真扩增，生成大量微小肿瘤进行药物筛选的一种高通量药效检测技术，实现肿瘤患者的精准个体化治疗，这一技术有别于基因检测的技术，应用范围更广泛，可用于早中晚期及基因检测找不到靶向药物的肿瘤患者。为改善肿瘤患者的治疗效果带来新的希望。

随着对肿瘤细胞凋亡机制的深入研究，药物诱导肿瘤细胞凋亡已成为目前肿瘤治疗的重要途径之一。高通量药物筛选技术是将多种技术方法有机结合而形成的新的技术体系，它以分子水平或细胞水平的试验方法为基础，以微板形式作为实验工具载体，以自动化操作系统执行实验过程，以灵敏、快速的检测仪器采集实验数据，以计算机对实验获得的数据进行分析处理，在同一时间内对数以千、万计的样品进行检测，并以相应的数据库支持整个技术体系的正常运转。

据有关报道，20世纪90年代初期，一个实验室采用传统的方法，借助20余种药物作用靶位，一年内仅能筛选7.5万个样品。而在1997年高通量筛选发展的初期，采用100余种靶位，每年可筛选100万个样品。到1999年，由于高通量筛选的进一步完善，每天的筛选量就高达10万种化合物。

高通量药物筛选可以分成四部分：药物筛选模型、高容量的样品库、自动化工作站和高效率的数据处理系统，其中药物筛选模型是关键，高容量的样品库是药物筛选的先决条件。

随着高通量药物筛选的发展，将其运用于癌症药物的筛选可以加快药物筛选时间，减少人力物力，进而减轻患者的病痛，在短时间内发现可以有效治疗的药物，例如中国专利申请201510829192.1公开了一种抗包虫药物的高通量筛选方法，其具体公开了一种利用小鼠继发性细粒棘球蚴生发层细胞进行抗包虫药物的高通量筛选方法。采用的方案是：用细粒棘球蚴原头节感染实验小鼠，建立包虫病继发感染模型8-10个月后，剖检病鼠取出其体内棘球蚴囊，分离生发层细胞并建立细胞系。调整该细胞浓度并于96孔培养板中进行铺板，利用药物作用后细胞活性变化及细胞内源物质释放情况对药物作用效果进行评价，本发明极大地降低了药物筛选周期，不仅待测药物的用量少，而且提高了筛选精确度，降低了筛选成本。