[发明专利]一种肿瘤组织高活性储存运输液及其制备方法

说明书

本发明公开了一种肿瘤组织高活性保存运输液及其制备方法，成分包括：DMEM培养液和抗生素，该保存运输液中还含有氨基酸、生长因子、胰岛素和一定量的山梨醇，可以使组织形态保持较好，使制备的保存液具有很好地抗凝作用，并能保证肿瘤组织的活性较高，延长肿瘤组织在体外的保存时间，本发明中并通过控制各种分成的具体组分以及具体含量，对肿瘤组织起到很好的保护作用，该保存运输液能够维持其形态结构和生物活性，延长肿瘤组织在体外的保存时间，可以更好地保证肿瘤组织原代培养的成活率。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别是涉及一种肿瘤组织高活性储存运输液及其制备方法。

背景技术

储存液要保持细胞的生物活性以满足其在临床上的应用，因此，如何维持细胞的高活性成为治疗关键。之前，人们用生理盐水或葡萄糖作为保护液，但是由于缺乏营养、溶液的张力或等渗透力存在差异等原因，导致细胞在长期保存或运输中出现活力低下、大量溶胀死亡等现象。随后，人们不断改善储存液的组成系统添加了KCl、柠檬酸钠，白蛋白、维生素等，形成保存液。虽然这些保存液在较长时间内很好的维持了细胞活性，但组成成分复杂，配制过程繁琐。

目前，常见的肿瘤组织体外储存液为磷酸缓冲盐溶液(Phosphate BufferSaline，PBS)和细胞培养基。其中PBS缓冲液的主要成分包括磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、氯化钠和氯化钾等，具有盐平衡、可调整的适宜的pH缓冲作用；细胞培养基的主要成分包括基础培养基、牛血清、抗生素等，可用于维持细胞的生长增殖。但是在实际使用过程中发现，PBS缓冲液成分简单，但是功能局限，不能很好地保持体外肿瘤组织的生物活性；细胞培养及主要用来维持细胞的生长增殖，不是作为肿瘤组织储存液的最佳选择，使用PBS和细胞培养基作为肿瘤细胞储存液时，保留肿瘤细胞的活性有限，从而致使肿瘤组织移植的成功率很低。

为了解决上述问题，中国专利申请201710175519.7中公开了一种肿瘤组织体外保存液及其制备方法，所述方法包括：在基础培养基中加入抗生素得到A溶液；在天然培养基中溶解牛磺酸，再加入聚乙二醇辛基苯基醚得到B液，将所述B液加入到所述A液中并混匀，得到所述肿瘤组织体外保存液，通过该发明所述方法制备的体外保存液，能够维持肿瘤组织在体外保存时的生物活性，延长肿瘤组织地体外保存时间，提高肿瘤移植的成功率。

当今肿瘤治疗依然是医学界面临的巨大难题，由于不同肿瘤细胞所适用的药物不同，更加有针对性的治疗肿瘤，医生在对不同肿瘤患者用药时，需要筛选对患者最有利，副作用小并具有靶向作用的药物，因此在手术过程中需要切下长度为0.5-1.5厘米的小标本或术前穿刺取出微标本，冲洗后放入保存液中，在一定温度条件下，一定时间内运送到细胞培养机构，对肿瘤细胞进行原代培养，得到原代肿瘤细胞株，用于筛选对患者最有效的药物。因此需要制备一种组织保存运输液，可以保证细胞或组织在长时间运输过程中保持较高的活性，保证培养过程中细胞有较高的成活率。

例如中国专利申请公开了一种细胞保存液，包括如下物质：白蛋白、低分子肝素钠、海藻糖和生理盐水。本发明的有益效果：本发明所述的细胞保存液，其中，所使用的白蛋白可以维持溶液适度的粘度和渗透压，同时可以防止细胞黏连，维持细胞生物活性。肝素钠可以防止纤维蛋白生成，进一步防止细胞黏连。而海藻糖是一种非特异性天然保护剂，具有保护生物组织、细胞和生物大分子的作用，可以很好的保证较长时间的保存和运输中细胞的生物活性，因此，本发明的细胞保存液对细胞的活力和形态起到优良的维持作用，可适应较长时间保存和运输，维持其生物活性。该申请中保存的细胞为间充质细胞和中央记忆型T细胞，对于肿瘤细胞的保存和运输并没有任何描述。

肿瘤细胞环境要求与正常细胞有所区别，肿瘤细胞保存液缺点在于保存液对肿瘤细胞的生物活性保护还不够理想，保存细胞成活率未达到令人满意的效果。为了适应临床的需要，开发一种能适应长时间运输并提高肿瘤细胞保存活率的保存液是十分必要的。

发明内容