[发明专利]一种针对中性疏水性多肽的纯化方法

说明书

本发明公开了一种针对中性疏水性多肽的纯化方法，主要解决现有对于中性疏水性多肽难以纯化，难以获得高纯度产品或者产品得率极低的问题。本发明纯化包括中性疏水性多肽的强弱分类概念，溶解方法的选择，色谱柱的选择，分析与制备流动相的选择以及洗脱收集的步骤。所述的中性疏水性多肽序列中含有Ala,Ile,Val,Leu原料的多肽；中性疏水性多肽的溶解方法可以选择六氟异丙醇或尿素中的一种溶解，也可以选择丙酮或异丁醇中的一种大量稀释震荡搅拌，经过硅藻土与硅胶填料不同配比做成的PE柱过滤得清液；色谱柱的选择为以硅胶键合的固定相填料的色谱柱或者以聚苯乙烯二乙烯苯为基质的固定相填料的色谱柱，分析与制备流动相的选择根据溶解方法的不同来选择特有的体系，并进行疏水性多肽的洗脱收集。

技术领域

本发明涉及到多肽纯化技术领域，尤其涉及到针对中性疏水性多肽的纯化方法。

背景技术

生物活性多肽是蛋白质中20个天然氨基酸以不同组成和排列方式构成的从二肽到复杂的线性、环形结构的不同肽类的总称，是源于蛋白质的多功能化合物。 人体很多活性物质都是以肽的形式存在的。多肽涉及人体的激素、神经、细胞生长和生殖各领域，其重要性在于调节体内各个系统和细胞的生理功能，激活体内有关酶系，促进中间代谢膜的通透性，或通过控制DNA转录或影响特异的蛋白合成，最终产生特定的生理效应。多肽是涉及人体内多种细胞功能的重要物质。多肽可以合成细胞，并调节细胞的功能活动。肽在人体作为神经递质，传递信息。多肽可在人体作为运输工具，将人体所食的各种营养物质与各种维生素、生物素、钙及对人体有益的微量元素输送到人体各细胞、器官和组织。多肽是人体重要的生理调节物，它可全面调节人体生理功能，增强和发挥人体生理活性，它具有重要的生物学功能。多肽对人的细胞活性、功能活动、生命存在太重要了。所以，目前对于多肽的生产研究就显得尤为重要。

目前对于多肽的纯化我们都有一定的了解，常规亲水性的多肽也有很好的纯化方法，得到很高的产品是收率。但是对于疏水性的多肽，尤其是多半含有Ala,Ile,Val原料的中性疏水性多肽，目前仍然会存在因为没有办法完全溶解多肽而无法纯化，或者是因为选择的溶解方法亦或是流动相的不同，造成中性疏水性多肽的收率极低，甚至无法达到高纯度的要求。现今中性疏水性多肽的溶解方法多数选择DMSO或者强酸强碱之类，但是DMSO黏度过大基本上很难使多肽吸附在色谱柱上，强酸强碱溶解的多肽不仅会降低色谱柱的使用寿命，而且大部分多肽会被强酸强碱带出色谱柱而造成极少量的洗脱分离。现有技术领域有选择正相色谱进行疏水性多肽的分离，但是正相色谱的分离效果很差，色谱柱的选择性也有局限，对于获得高纯的中性疏水性多肽有很大的难度。

本发明的提出为了解决现有的缺陷，针对性的解决目前针对中性疏水性多肽难纯化的问题。

发明内容

本发明的目的在于提供一种中性疏水性多肽的纯化方法，有针对性的解决中性疏水性多肽难纯化，难以获得高纯度的产品或者纯化收率极低的技术问题。

为实现上述目的，本发明的技术方案如下：一种针对中性疏水性多肽的纯化方法，其特征在于：包括如下步骤：

1.定义中性疏水性多肽的强弱性，分类如下：

1）多肽序列中含有Ala,Ile,Val,Leu疏水性氨基酸的个数占有30-50%，定义为弱中性疏水性多肽；

2）肽序列中含有Ala,Ile,Val,Leu疏水性氨基酸的个数占有50-100%，定义为强中性疏水性多肽。

2.根据中性疏水性多肽的强弱性选择不同的溶解方法，方法如下：

1）弱中性疏水性多肽：选择丙酮或异丁醇中的一种大量稀释震荡搅拌，经过硅藻土与硅胶填料不同配比做成的PE柱过滤得清液；

2）强中性疏水性多肽：选择六氟异丙醇或尿素中的一种溶解，经过硅藻土与硅胶填料不同配比做成的PE柱过滤得清液。

3.根据选择不同的溶解方法选择不同的分析与制备的流动相体系，如下：