[发明专利]一种探针法数字定量PCR试剂盒及其应用和使用方法

说明书

本发明公开了一种探针法数字定量PCR试剂盒及其应用和使用方法。公开了环状RNA hsa_circ_{_}051778为检测指标在探针法数字定量PCR试剂盒中的应用，通过检测胸水外泌体样本中环状RNA hsa_circ_{_}051778拷贝数作为检测指标。所述试剂盒包括环状RNA hsa_circ_{_}051778特异性引物、环状RNA hsa_circ_{_}051778特异性探针、肺腺癌患者胸水外泌体RNA逆转录后所得到的cDNA、探针法数字PCR专用PCR扩增预混液即2x ddPCR Supermix for Probes和无菌去离子水。使用本发明所述检测工具对肺腺癌和结核性胸膜炎进行鉴别，检测结果表明：该检测工具的灵敏度可达90%以上左右，高于目前临床使用的单一方法。

技术领域

本发明涉及试剂盒及其应用，尤其涉及一种探针法数字定量PCR试剂盒及其应用和使用方法。

背景技术

肺腺癌和结核性胸膜炎是临床常见的呼吸系统疾病，两种疾病的一些临床表现较为相似，但是其治疗方案和预后却有明显的不同，因此准确地诊断这两种疾病对于患者的预后极为重要。

胸腔积液即胸水，是指机体受到某些疾病影响胸膜后导致的胸腔液体异常增多。肺腺癌和结核性胸膜炎是引发胸水的常见病因，可通过检测胸水中的结核杆菌或者肿瘤细胞来确诊，但是在实际临床工作中阳性检测率较低，因此临床上还将通过病史、血液检测、胸水生化检测、血沉检测、结核抗体检测、细胞染色体检测、肿瘤抗原检测等等对两者进行鉴别诊断，鉴别过程较为繁琐，耗时，也增加了患者的经济负担。

发明内容

本发明旨在解决现有技术中肺腺癌和结核性胸膜炎难以鉴别的问题，提出了探针法数字定量PCR试剂盒及其应用，该试剂盒能够快速地对肺腺癌和结核性胸膜进行鉴别，同时检测准确率高。

为了实现上述发明目的，本发明的技术方案如下：

环状RNA hsa_circ_{_}051778作为检测指标在探针法数字定量PCR试剂盒中的应用。

一种如上所述的探针法数字定量PCR试剂盒，所述试剂盒通过检测胸水外泌体样本中环状RNA hsa_circ_{_}051778的拷贝数作为检测指标。

进一步地,本发明所述试剂盒包括环状RNA hsa_circ_{_}051778特异性引物、环状RNA hsa_circ_{_}051778特异性探针、肺腺癌患者胸水外泌体RNA逆转录后所得到的cDNA、探针法数字PCR专用PCR扩增预混液和无菌去离子水。所述探针法数字PCR专用PCR扩增预混液为2x ddPCR Supermix for Probes。

进一步地,本发明所述环状RNA hsa_circ_{_}051778特异性引物包括前引物和后引物；所述前引物序列为：5’- GAAATAAAATGCCAAAGAACACACA-3’；所述后引物序列为5’-TGGGCAGAGAATGACGAACAG-3’。

进一步地,本发明所述环状RNA hsa_circ_{_}051778特异性MGB探针的序列为：5’-TGTCAGCCAGCCCAC-3’。

进一步地,本发明所述环状RNA hsa_circ_{_}051778特异性MGB探针序列5’端标记FAM荧光报告基团、VIC 荧光报告基团或HEX荧光报告基团；所述环状RNA hsa_circ_{_}051778特异性MGB探针序列3’端标记Minor Groove Binder和Quencher 荧光淬灭基团。

进一步地,本发明所述的探针法数字定量PCR试剂盒的使用方法，包括以下步骤：

A.取样