[发明专利]细胞冻存液

说明书

本发明细胞冻存液，含有基础培养基、甘油、胎牛血清和非渗透性的保护剂，各组分的含量为：基础培养基80～94v/v％、甘油5～10v/v％、胎牛血清1～10v/v％、非渗透性的保护剂0.01～0.10w/v％；所述基础培养基为RPMI‑1640、MEM、高糖DMEM、低糖DMEM或DMEM‑F12；所述非渗透性保护剂为海藻酸钠、透明质酸钠或γ‑聚谷氨酸；本发明不含二甲基亚砜，而是通过非渗透性保护剂与甘油和胎牛血清的不同搭配来获取好的冷冻效果，具有很强的水分子络合能力，在冷冻功能上与二甲基亚砜相似，但能减少冷冻过程中细胞内冰晶的形成；作为细胞冻存液，添加成份明确、安全性高、对细胞损伤小、细胞冻存前后形态一致、细胞复苏后细胞存活率高、增殖能力良好。

技术领域

本发明涉及细胞及生物工程学技术领域，具体的，是一种细胞冻存液。

背景技术

细胞冻存是生物研究中的重要环节之一，它对人工培养细胞的冻存、防止由于细胞传代培养所导致的细胞退化、防止传代培养中的细菌污染、解决维持传代培养过程中的一系列问题具有重要作用。然而，细胞冻存也会在一定程度上使细胞受到损伤。

目前在细胞冻存领域中，人们广泛采用的是冷冻剂(英语全称Cryo-ProtectantAgent，简称CPA)。所述冷冻剂包括渗透型冷冻剂和非渗透型冷冻剂，其中，渗透型冷冻剂主要包括二甲基亚砜、甘油、乙二醇、丙二醇、乙酰胺和甲醇；其的保护机理是：在细胞冷冻悬浮液完全凝固之前，冷冻剂能进入细胞内，在细胞内外形成一定的摩尔浓度，降低细胞内外尚未结冰的溶液中的电解质浓度，以保护细胞免受高浓度电解质的损伤，同时，能使细胞内水分不会过多外渗，能避免细胞过度脱水而皱缩。所述冷冻剂能有效降低细胞冻存过程中细胞的溶质损伤和冰晶损伤。目前采用的冷冻剂中，二甲基亚砜(DMSO)是细胞保存中最常用的冷冻剂，但是，它同时对细胞也存在一定的毒性，常温下能使细胞内蛋白变性，因此，这些不足限制了它的进一步应用。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足并在现有研究成果的基础上，提供一种细胞冻存液，它不含二甲基亚砜，而是通过海藻酸钠、透明质酸、γ-聚谷氨酸这些非渗透性的保护剂与甘油和胎牛血清的不同搭配来获取较好的冷冻效果，可用于细胞的低温冻存，具有细胞冻存前后形态一致、细胞复苏后存活率高、增殖能力良好的积极效果。

为实现上述目的，本发明采取了以下技术方案。

一种细胞冻存液，其特征在于，含有基础培养基、甘油、胎牛血清和非渗透性的保护剂，其各组分的含量为：

进一步，所述基础培养基为RPMI-1640、MEM、高糖DMEM、低糖DMEM或DMEM-F12。

进一步，所述非渗透性的保护剂为海藻酸钠(Sodium alginate)、透明质酸钠(Hyaluronic acid sodium salt)或γ-聚谷氨酸(γ-polyglutamic acid)。

本发明细胞冻存液的积极效果为：

(1)不含二甲基亚砜，而是通过非渗透性的保护剂——海藻酸钠、透明质酸钠、γ-聚谷氨酸与甘油和胎牛血清的不同搭配来获取较好的冷冻效果，具有很强的水分子络合能力，在冷冻功能上与二甲基亚砜相似，但能减少冷冻过程中细胞内冰晶的形成，可用于细胞的低温冻存。

(2)作为细胞冻存液，具有细胞冻存前后形态一致、细胞复苏后存活率高、冻存复苏后细胞的增殖能力良好的积极效果。

(3)添加成份明确，安全性高，对细胞的损伤小；可用于替代目前最常用的二甲基亚砜冷冻液。

附图说明

图1为HeLa细胞冻存前在显微镜下的照片。

图2为用本发明的细胞冻存液冻存复苏后的HeLa细胞第一天在显微镜下的照片。