[发明专利]一种靶向RunX2基因的小鼠成骨样细胞慢病毒载体及其构建方法有效
| 申请号： | 201810902646.7 | 申请日： | 2018-08-09 |
| 公开（公告）号： | CN109055429B | 公开（公告）日： | 2021-10-08 |
| 发明（设计）人： | 秦晗;蔡军;龚永庆 | 申请（专利权）人： | 连云港市第一人民医院 |
| 主分类号： | C12N15/867 | 分类号： | C12N15/867;C12N15/66 |
| 代理公司： | 北京思创大成知识产权代理有限公司 11614 | 代理人： | 高爽 |
| 地址： | 222000 江苏*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 靶向 runx2 基因 小鼠 成骨样 细胞 病毒 载体 及其 构建 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种靶向Runx2基因的小鼠成骨样细胞慢病毒载体的构建方法，其特征在于，该构建方法包括以下步骤：
步骤1：根据Runx2基因序列，设计合成双链DNA片段；
步骤2：将合成的双链DNA片段连接到GV493载体的多克隆位点中构建Runx2-RNA重组载体；
步骤3：将构建的Runx2-RNA重组载体与shRNA慢病毒共转染到小鼠成骨样细胞培养，得到靶向Runx2基因的小鼠成骨样细胞慢病毒载体；
其中，所述双链DNA片段的正义链具有SEQ ID NO：1所示序列，反义链具有SEQ ID NO：2所示序列；
所述小鼠成骨样细胞为MC3T3-E1细胞；所述共转染在含4-6μg/ml聚凝胺的ENi.S感染培养基中进行，按MOI＝40感染MC3T3-E1细胞。
2.根据权利要求1所述的靶向Runx2基因的小鼠成骨样细胞慢病毒载体的构建方法，其中，所述GV493载体的多克隆位点连接双链DNA片段的酶切位点为Age I和EcoR I。
3.由权利要求1-2中任意一项所述的构建方法得到的靶向Runx2基因的小鼠成骨样细胞慢病毒载体。
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