[发明专利]一种日本黄姑鱼的鱼皮免疫调节肽的制备方法

说明书

本发明涉及日本黄姑鱼的多肽制备技术领域，具体涉及一种日本黄姑鱼的鱼皮免疫调节肽的制备方法，将鱼皮经脂肪酶与异丙醇联合脱脂，消除了免疫调节肽的苦味，然后经酒石酸、脉冲电场和还原胺化试剂作用后削弱鱼皮分子蛋白间的交联程度，强化鱼皮蛋白的溶胀，再经50～60℃温度下由木瓜蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、胰蛋白酶、曲霉菌丝氨酸蛋白酶或/和碱性蛋白酶等对鱼皮蛋白分解作用较弱的蛋白提取酶的作用使鱼皮中的鱼皮蛋白尽可能的溶出，然后经中性蛋白酶和中性金属蛋白酶共同作用分解鱼皮蛋白得到鱼皮免疫调节肽，鱼皮蛋白的利用率高，断链分解均匀性高，得到的免疫调节肽的分子量为2000～3500Da。

技术领域

本发明涉及日本黄姑鱼的多肽制备技术领域，具体涉及一种日本黄姑鱼的鱼皮免疫调节肽的制备方法。

背景技术

日本黄姑鱼是石首鱼科中黄姑鱼属的一种鱼类，分布在朝鲜、日本南部以及中国沿海等地区，目前在浙江省舟山渔场已经进行引进养殖，具有幼苗发育迅速、抗病能力强、生长周期短、营养价值高、经济效益等优点。日本黄姑鱼在加工过程中会产生如鱼皮、鱼骨、鱼内脏等下脚料，为进一步提高日本黄姑鱼的经济价值，合理利用资源，有必要开发利用日本黄姑鱼下脚料的途径。

免疫调节肽为从生物体或食物蛋白中获取的具有免疫调节活性的肽，可通过影响免疫器官生长发育、免疫细胞活性与功能以及免疫分子表达、合成和释放而参与机体特异性和非特异性免疫功能的调节，对维持机体免疫功能正常和健康具有重要作用。目前免疫调节肽的获得途径主要有：从生物机体组织器官中直接提取、酶解食物蛋白获得、在已知一些免疫调节肽结构序列的基础上通过化学法合成、应用DNA重组技术表达已有的免疫调节肽，其中第一种途径来源广，获取方便。目前研究表明，日本黄姑鱼的鱼皮中含有丰富的免疫调节肽，因此通过合适的途径提取日本黄姑鱼的鱼皮免疫调节肽一方面提高了日本黄姑鱼的经济价值和利用率，另一方面也拓宽了免疫调节肽的来源，无疑具有较好的效益。目前多采用酶解鱼皮制备免疫调节肽，但该方法还存在处理调节苛刻导致鱼皮蛋白利用率低、免疫调节肽活性不够等问题。

中国专利2006100701172，专利名称一种利用鳕鱼皮制取鱼蛋白活性肽粉的方法，申请日期2016年8月31日，公开了一种将鳕鱼皮蒸煮后加复合蛋白酶分解，然后脱色喷雾制成鱼蛋白活性肽，但是该方法存在鱼皮蛋白高温蒸煮变性失活、鱼皮蛋白利用率低、直接酶解鱼皮浆液使所得活性肽粉中可能含有变性鱼皮蛋白、活性肽活性一般等不足。

发明内容

针对目前酶解法从鱼皮中获取多肽还还存在鱼皮蛋白利用率低等问题，本申请的目的在于提供一种日本黄姑鱼的鱼皮免疫调节肽的制备方法，以日本黄姑鱼的鱼皮下脚料为原料制备鱼皮免疫调节肽，制备过程温和，鱼皮中的鱼皮蛋白得到充分利用且活性得到保证，得到的免疫调节肽的制备效率高、活性好。

本发明提供如下的技术方案：

一种日本黄姑鱼的鱼皮免疫调节肽的制备方法，包括以下步骤：

（1）用水将鱼皮清洗干净后剪片、脱脂待用；

（2）将脱脂后的鱼皮置于低浓度碱液中浸泡，然后用水洗至中性后冷冻备用；

（3）将步骤（2）处理后鱼皮置于水中，加酸液调节pH值2.0～4.6得浸泡液，向浸泡液中加鱼皮质量1%～5%的还原胺化试剂搅拌处理3～5小时，过滤鱼皮并冲洗至中性后冷冻备用；

（4）向步骤（3）处理后的鱼皮加入30～50倍质量的水后匀浆，加热至水温50～60℃后加入蛋白提取酶处理，然后加热灭酶活性后离心分离，所得上清液为鱼皮蛋白原液；

（5）向鱼皮蛋白原液中加入蛋白分解酶处理，然后加热灭酶活后离心分离得到酶解液；

（6）真空冷冻干燥酶解液得到鱼皮免疫调节肽干粉。