[发明专利]一种检测马铃薯卷叶病毒的荧光定量PCR引物和试剂盒

说明书

本发明涉及生物检测技术领域，具体涉及一种检测马铃薯卷叶病毒的荧光定量PCR引物和试剂盒，所述引物包括用于扩增内参基因的引物Actin‑F和引物Actin‑R、以及用于扩增PLRV基因的引物PLRV2‑F和引物PLRV2‑R。所述试剂盒包括上述所述的引物。本发明的引物和试剂盒能在分子水平上检测出马铃薯植株中存在的马铃薯卷叶病毒，并能对病毒基因的表达情况进行定量分析，具有高效、特异性强，准确性和重复性好，灵敏度高，检测速度快，材料消耗少，成本低以及能够定量检测等优点。

技术领域

本发明涉及生物检测技术领域，具体涉及一种检测马铃薯卷叶病毒的荧光定量PCR引物和试剂盒。

背景技术

马铃薯卷叶病毒（PLRV）被归类为黄化病毒组（Luteovirus），是马铃薯卷叶病毒属的一员，是马铃薯病毒病中危害马铃薯生产的最主要病毒之一。PLRV病毒粒体呈球状，等轴对称，直径24nm，是一种正链RNA病毒，无3＇端poly A, 5＇端严格保守的序列5～20bp。该病毒以种薯传播，在田间以持久方式由蚜虫进行传播，不能通过机械传播，寄主植物的维管束是其主要的分布部位。病毒在寄主体内含量低，难以大量提纯，致使人们不能很好的对PLRV进行彻底的分子生物学研究。 鉴定PLRV传统的方法包括了目测法、生物学实验法（也称为“指示植物法”）以及电镜技术法等。随后出现了酶联免疫检测法和核酸分子检测技术。与实时荧光定量PCR技术相比，其他方法都存在一些不足之处，如耗时比较长、检测材料消耗量大、灵敏度低以及不能够对病毒进行定量检测等。实时荧光定量PCR技术具有特异性强、灵敏度高，不仅可以对样本进行实时快速的检测，而且能够进行定量分析。

发明内容

为了克服现有技术中存在的缺点和不足，本发明的目的在于提供一种检测马铃薯卷叶病毒的荧光定量PCR引物及其在检测马铃薯卷叶病毒的应用和制备检测马铃薯卷叶病毒的试剂盒中的应用，该引物特异性好，检测灵敏精确。

本发明的另一目的在于提供一种检测马铃薯卷叶病毒的荧光定量PCR试剂盒及其在检测马铃薯卷叶病毒的应用，该试剂盒能在分子水平上检测出马铃薯植株中存在的马铃薯卷叶病毒，并能对病毒基因的表达情况进行定量分析，准确性好，灵敏度高。

本发明的目的通过下述技术方案实现：一种检测马铃薯卷叶病毒的荧光定量PCR引物，所述引物包括用于扩增内参基因的引物Actin-F和引物Actin-R、以及用于扩增PLRV基因的引物PLRV2-F和引物PLRV2-R，4条引物的核苷酸序列分别为：

Actin-F：5’-GCTTCCCGATGGTCAAGTCA-3’

Actin-R：5’-GGATTCCAGCTGCTTCCATTC-3’

PLRV2-F：5’-CGCCGAAGACGCAGAAGAGGA-3’

PLRV2-R：5’-AGACTCGGCCCGAAGGTGAA-3’。

上述所述的引物在检测马铃薯卷叶病毒的应用。

上述所述的引物在制备检测马铃薯卷叶病毒的试剂盒中的应用。

本发明的另一目的通过下述技术方案实现：一种检测马铃薯卷叶病毒的荧光定量PCR试剂盒，所述试剂盒包括上述所述的引物。

上述所述的试剂盒在检测马铃薯卷叶病毒的应用。

本发明的有益效果在于：本发明的引物特异性好，检测灵敏精确。

本发明的试剂盒能在分子水平上检测出马铃薯植株中存在的马铃薯卷叶病毒，并能对病毒基因的表达情况进行定量分析，准确性好，灵敏度高。

附图说明

图1是本发明提取总RNA的凝胶电泳检测成像图（其中，a、b均为同一样品RNA）。