[发明专利]一种构建自闭症谱系障碍的小鼠模型的方法有效
| 申请号： | 201810914416.2 | 申请日： | 2018-08-10 |
| 公开（公告）号： | CN108949831B | 公开（公告）日： | 2022-06-21 |
| 发明（设计）人： | 陆宗阳;刘真;黄行许 | 申请（专利权）人： | 上海科技大学 |
| 主分类号： | C12N15/89 | 分类号： | C12N15/89;C12N15/85;C12N5/10;A01K67/027 |
| 代理公司： | 上海申汇专利代理有限公司 31001 | 代理人： | 翁若莹;王婧 |
| 地址： | 200120 上*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 构建 自闭症 谱系 障碍 小鼠 模型 方法 | ||
1.一种构建自闭症谱系障碍的小鼠模型的方法，其特征在于，包括：在小鼠受精卵时期利用胚胎显微注射技术胞浆注射如SEQ ID NO:11所述核苷酸序列所示的甲基化载体以及靶向MeCP2基因TSS区的如SEQ ID NO:24所述的可表达gRNA载体，得到自闭症谱系障碍的小鼠模型；其中，所述的甲基化载体将人源DNMT3L和DNMT3A催化功能域融合到dCas9片段的N端。
2.如权利要求1所述的构建自闭症谱系障碍的小鼠模型的方法，其特征在于，所述的甲基化载体通过将人源DNMT3L和DNMT3A的催化功能域连接至dCas9蛋白N端形成。
3.如权利要求1所述的构建自闭症谱系障碍的小鼠模型的方法，其特征在于，所述的靶向MeCP2基因TSS区的gRNA载体含有至少一条靶向MeCP2基因特异位点的gRNA片段。
4.如权利要求1所述的构建自闭症谱系障碍的小鼠模型的方法，其特征在于，所述的构建自闭症谱系障碍的小鼠模型的方法还包括：在小鼠受精卵时期利用胚胎显微注射技术胞浆注射如SEQ ID NO:14所述核苷酸序列所示的甲基化对照载体以及靶向MeCP2基因TSS区的如SEQ ID NO:24所述的可表达gRNA载体，得到自闭症谱系障碍的小鼠对照模型，其中，所述的甲基化对照载体通过突变甲基化载体的DNMT3A催化活性位点得到。
5.如权利要求1至4中任一项所述的构建自闭症谱系障碍的小鼠模型的方法，其特征在于，所述的显微注射的条件为20-80ng/μl甲基化载体或甲基化对照载体，5-50ng/μl靶向MeCP2基因TSS区的gRNA载体。
6.如权利要求1至4中任一项所述的构建自闭症谱系障碍的小鼠模型的方法在实现体外细胞中位点特异的甲基化进而研究基因特异位点甲基化后对功能的影响中的应用。
7.如权利要求1至4中任一项所述的构建自闭症谱系障碍的小鼠模型的方法在用于构建MeCP2位点特异甲基化引起的ASD的小鼠模型中的应用。
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