[发明专利]一种针对乙型肝炎病毒YMDD基序区耐药突变的试剂盒在审
| 申请号： | 201810916683.3 | 申请日： | 2018-08-13 |
| 公开（公告）号： | CN109234367A | 公开（公告）日： | 2019-01-18 |
| 发明（设计）人： | 徐志勇;秦伟 | 申请（专利权）人： | 武汉千麦医学检验所有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6858 | 分类号： | C12Q1/6858;C12Q1/70;C12N15/11 |
| 代理公司： | 武汉红观专利代理事务所(普通合伙) 42247 | 代理人： | 陈凯 |
| 地址： | 430011 湖北省武汉市江岸*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 乙型肝炎病毒 试剂盒 基序 耐药突变 分子生物学技术 耐药突变检测 耐药基因 特异引物 酶系统 敏感度 设计型 检测 双相 探针 突变 污染 | ||
1.一种针对乙型肝炎病毒YMDD基序区耐药突变的引物组，其特征在于：所述引物组合包括：检测rtM204I突变位点的特异性引物序列SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2，检测rtM204V突变位点的特异性引物序列SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.3，检测rtL180M突变位点的特异性引物序列SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.5。
2.一种针对乙型肝炎病毒YMDD基序区耐药突变的探针，其特征在于：所述探针包括：针对rtM204I/V突变位点对应的探针序列SEQ ID NO.6，针对rtL180M突变位点对应的探针序列SEQ ID NO.7，所述序列SEQ ID NO.6和SEQ ID NO.7的5’端标记有荧光基团，3’端标记有淬灭基团。
3.一种针对乙型肝炎病毒YMDD基序区耐药突变的酶混合液，其特征在于：包括RNaseH2和热启动Taq DNA聚合酶，所述RNase H2酶与Taq DNA聚合酶浓度比为1:50～1:500。
4.一种针对乙型肝炎病毒YMDD基序区耐药突变的试剂盒，其特征在于：包括权利要求1所述特异性引物序列SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.5，权利要求2所述探针序列SEQ ID NO.6和SEQ ID NO.7，权利要求3所述酶混合液，PCR缓冲液、dNTPs。
5.如权利要求4所述的针对乙型肝炎病毒YMDD基序区耐药突变的试剂盒，其特征在于：包括如下试剂：
(1)PCR反应预混液1：主要成分包括：PCR缓冲液、4种dNTPs、SEQ ID NO.6、由SEQ IDNO.1和SEQ ID NO.2混合而成的引物组；
(2)PCR反应预混液2：主要成分包括：PCR缓冲液、4种dNTPs、SEQ ID NO.6、由SEQ IDNO.1和SEQ ID NO.3混合而成的引物组；
(3)PCR反应预混液3：主要成分有PCR缓冲液、4种dNTPs、探针SEQ ID NO.7、引物由SEQID NO.4和SEQ ID NO.5混合而成；
(4)酶混合液：主要成分包括：RNase H2和热启动Taq DNA聚合酶，所述RNase H2酶与Taq DNA聚合酶浓度比为1:50～1:500；
(5)阴性质控品：为经过灭活处理的YMDD突变阴性的正常人血清；
(6)阳性质控品：为经过灭活处理的YMDD rtM204I+rtL180M突变阳性的人血清。
6.如权利要求5所述的针对乙型肝炎病毒YMDD基序区耐药突变的试剂盒，其特征在于：所述酶混合液中，RNase H2酶与Taq DNA聚合酶浓度比为1:250。
7.如权利要求5所述的针对乙型肝炎病毒YMDD基序区耐药突变的试剂盒，其特征在于：所述探针序列SEQ ID NO.6和SEQ ID NO.7的5’端标记有FAM荧光基团，3’端标记有淬灭基团BHQ1。
8.如权利要求5所述的针对乙型肝炎病毒YMDD基序区耐药突变的试剂盒，其特征在于：所述引物序列SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4的3'端连接有间隔臂。
9.如权利要求5所述的针对乙型肝炎病毒YMDD基序区耐药突变的试剂盒，其特征在于：试剂还包括DNA提取液。
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