[发明专利]一种测定青芥辣中山葵含量的方法

权利要求书

1.一种测定青芥辣中山葵含量的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

（1）将青芥辣样品加入无菌研钵中，倒入液氮充分研磨，直至样品成粉末，备用；

（2）提取步骤（1）所得样品粉末的基因组；

（3）根据山葵的myr基因和辣根的trnL基因序列，设计用于荧光定量PCR的特异性引物；

（4）将山葵和辣根基因组稀释成不同浓度，通过荧光定量法测定不同浓度山葵和辣根基因的阈值循环数（Ct）；

（5）通过荧光定量法测定样品中山葵和辣根阈值循环数（Ct），以辣根基因为参比基因，选择步骤4中任一山葵基因组浓度的样品作为标准样品，根据相对定量的方法计算出青芥辣样品中山葵的含量；

其中，所述山葵的myr基因序列的PCR特异性引物为：

正向引物：ACGCCCAGCCAACTAAAACAATA

反向引物：CACCCGTCTCCTTGATGACCTTA

辣根的trnL基因序列的PCR特异性引物为：

正向引物：GGTAGTGAACTCCATTTG

反向引物：ACGGACTTAATTAGATTGAG。

2.根据权利要求1所述的一种测定青芥辣中山葵含量的方法，其特征在于，所述无菌研钵需预先冷冻。

3.根据权利要求1所述的一种测定青芥辣中山葵含量的方法，其特征在于，所述步骤（2）利用植物基因组提取试剂盒提取基因。

4.根据权利要求1所述的一种测定青芥辣中山葵含量的方法，其特征在于，所述山葵的myr基因如SEQ ID NO.1所示。

5.根据权利要求1所述的一种测定青芥辣中山葵含量的方法，其特征在于，荧光定量PCR反应体系为25 μL，具体为：SYBR酶：12.5 μL，上游引物：0.5 μL，下游引物：0.5 μL，双蒸水：1.5 μL，模板：10 μL。

6.根据权利要求1或5所述的一种测定青芥辣中山葵含量的方法，其特征在于，荧光定量PCR反应程序：①94 ℃保持10 s； ② 94 ℃保持5 s；③ 55 ℃保持30 s；④ 72 ℃保持5min，其中步骤②和③循环40次。

7.根据权利要求1所述的一种测定青芥辣中山葵含量的方法，其特征在于，所述步骤（5）中的标准样品的山葵浓度为10%。

8.权利要求1-5任一所述的一种测定青芥辣中山葵含量的方法在测定青芥辣中山葵的含量中的应用。