[发明专利]一种双酶水解制备透明质酸奇数寡糖的方法

权利要求书

1.一种制备奇数聚合度透明质酸寡糖的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

（1）大分子透明质酸水解：使用水蛭型透明质酸酶LHase与牛睾丸型透明质酸酶BTH两种透明质酸水解酶分别作用于分子量为10⁵~10⁶Da的大分子透明质酸得到一系列奇数聚合度透明质酸寡糖，所述大分子透明质酸的浓度为10~20mg/mL；

（2）不同聚合度透明质酸寡糖的分离：利用凝胶填充的离子交换柱将步骤（1）得到的透明质酸寡糖进行分离纯化，用平衡液和洗脱液洗脱，按照洗脱峰收集产物，经过浓缩、脱盐即可得到产物中的奇数聚合度透明质酸寡糖；

其中，所述两种酶的水解顺序不限。

2.根据权利要求1所述的一种制备奇数聚合度透明质酸寡糖的方法，其特征在于，所述大分子透明质酸溶剂为水。

3.根据权利要求1或2所述的一种制备奇数聚合度透明质酸寡糖的方法，其特征在于，所述步骤（1）中所述水蛭型透明质酸酶的添加终浓度为5000~7000U/mL，作用时间为1~15h；所述牛睾丸型透明质酸酶的添加终浓度为1000~4000 U/mL，作用时间为1~15h。

4.根据权利要求3所述的一种制备奇数聚合度透明质酸寡糖的方法，其特征在于，所述步骤（2）中的脱盐方法为凝胶柱或透析袋脱盐中的任一种，其中凝胶柱为tide10/300GL凝胶柱，透析袋规格为0.5-1.0 KD。

5.根据权利要求4所述的一种制备奇数聚合度透明质酸寡糖的方法，其特征在于，所述步骤（2）中凝胶填充的离子交换柱为Q琼脂糖凝胶HP（QHP）填充的离子交换柱。

6.根据权利要求5所述的一种制备奇数聚合度透明质酸寡糖的方法，其特征在于，所述步骤（2）中平衡液为pH为7~9的Tris-HCl溶液，洗脱液为由平衡液配制的浓度为50~300mM的NaCl溶液。

7.根据权利要求6所述的一种制备奇数聚合度透明质酸寡糖的方法，其特征在于，所述步骤（2）中洗脱过程采用线性洗脱，洗脱体积为10~20倍的柱体积。