[发明专利]一种基于脱氧核酶修饰的磁珠颗粒用于锌离子检测的荧光方法有效
| 申请号： | 201810920626.2 | 申请日： | 2018-08-14 |
| 公开（公告）号： | CN108982458B | 公开（公告）日： | 2020-12-25 |
| 发明（设计）人： | 沈薇;李亚拿;祁桐;唐盛;孙俊;朱安妮;许孟婵;许孟媛;吴天韵 | 申请（专利权）人： | 江苏科技大学 |
| 主分类号： | G01N21/64 | 分类号： | G01N21/64 |
| 代理公司： | 南京苏高专利商标事务所(普通合伙) 32204 | 代理人： | 柏尚春 |
| 地址： | 212003*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 基于 脱氧 修饰 颗粒 用于 离子 检测 荧光 方法 | ||
1.一种基于脱氧核酶修饰的磁珠颗粒用于锌离子检测的荧光方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)取链霉亲和素包被磁珠(MBs)，离心，磁力架放置，将沉淀物用偶联缓冲液洗涤后，分散在偶联缓冲液中，加入生物素和FAM荧光素双标记的寡核苷酸序列为5’-/5Biotin/TTTTTTTTTACTCACTAT/rA/GGAAGAGATG-FAM-3’的Zn-Sub链，涡旋，离心，磁力架放置，分离出沉淀物，得Zn-Sub-MB缀合物；
(2)用剪切缓冲液将Zn-Sub-MB缀合物洗涤后，分散在剪切缓冲液中，配制成Zn-Sub-MB缀合物溶液；
(3)将寡核苷酸序列为5’-CATCTCTTCTCCGAGCCGGTCGAAATAGTGAGT-3’的Zn-Enz链和不同浓度的ZnCl2溶液加入到上述Zn-Sub-MB缀合物溶液中，孵化，离心，磁力架放置，取上清液，在荧光素的最大激发波长检测荧光强度，绘制锌离子与荧光强度相关的标准曲线；
(4)检测时，将寡核苷酸序列为5’-CATCTCTTCTCCGAGCCGGTCGAAATAGTGAGT-3’的Zn-Enz链和含有锌离子的待测物加入到上述Zn-Sub-MB缀合物溶液中，孵化，离心，取上清液，检测其中荧光素的荧光强度，从上述标准曲线上计算待测物中锌离子浓度。
2.根据权利要求1所述的基于脱氧核酶修饰的磁珠颗粒用于锌离子检测的荧光方法，其特征在于，步骤(1)中所述偶联缓冲液为：0.01M PBS，30mM NaCl，0.1％tween-20，pH7.4。
3.根据权利要求1所述的基于脱氧核酶修饰的磁珠颗粒用于锌离子检测的荧光方法，其特征在于，步骤(2)中所述剪切缓冲液为：0.01M PBS，70.53mM NaCl，0.1％tween-20，pH7.85。
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