[发明专利]一种对羟基苯丙氨酸含量测定方法

权利要求书

1.一种对羟基苯丙氨酸含量测定方法，其特征在于：包括以下步骤：

（1）标准曲线溶液的制备：

将对羟基苯丙氨酸溶解后逐级稀释，向稀释后的各级对羟基苯丙氨酸溶液中加入同位素内标液，混合均匀得对羟基苯丙氨酸标准曲线溶液；

（2）待测尿液样本的制备：

将待测尿液样本离心处理后，取上清液，用稀释液稀释后加入对羟基苯丙氨酸同位素内标液，混合均匀，得待测尿液样本；

（3）标准曲线的绘制：

将步骤（1）制备的标准曲线溶液进行液相质谱检测，线性回归分析，得到对羟基苯丙氨酸的标准曲线；

（4）待测尿液样本检测：

将步骤（2）制备的待测尿液样本进行液相质谱检测，检测结果带入步骤（3）得到的标准曲线中，计算对羟基苯丙氨酸浓度，计算结果乘以稀释倍数，得到待测尿液样本中对羟基苯丙氨酸的含量。

2.根据权利要求1所述的一种对羟基苯丙氨酸含量测定方法，其特征在于：所述标准曲线溶液与待测尿液样本中的内标液浓度一样。

3.根据权利要求2所述的一种对羟基苯丙氨酸含量测定方法，其特征在于：步骤（1）与步骤（2）中所述同位素内标液为对羟基苯丙氨酸各构型对应的氘代物、¹³C代物及¹⁵N代物。

4.根据权利要求3所述的一种对羟基苯丙氨酸含量测定方法，其特征在于：所述同位素内标液为L-对羟基苯丙氨酸-D2。

5.根据权利要求1所述的一种对羟基苯丙氨酸含量测定方法，其特征在于：步骤（1）中对羟基苯丙氨酸采用超纯水进行逐级稀释，稀释范围为1ng/ml-2000ng/ml。

6.根据权利要求1所述的一种对羟基苯丙氨酸含量测定方法，其特征在于：步骤（2）中待测尿液样本处理过程为：取人体待测尿液样本在15000rpm下离心，沉淀蛋白，取上清液稀释，过微孔过滤。

7.根据权利要求6所述的一种对羟基苯丙氨酸含量测定方法，其特征在于：待测尿液样本离心后上清液稀释倍数为20-100倍，微孔滤膜为孔径0.22μm的水性滤膜。

8.根据权利要求1所述的一种对羟基苯丙氨酸含量测定方法，其特征在于：步骤（3）中以标准曲线中校正浓度理论值为横坐标，以对羟基苯丙氨酸与同位素内标的面积比值为纵坐标进行线性回归分析，线性系数不小于0.99。

9.根据权利要求8所述的一种对羟基苯丙氨酸含量测定方法，其特征在于：所述标准曲线的接受标准为：校正标样回算浓度应在标示值的±15%内，至少75%校正标样，含最少6个有效浓度，不符合的校正标样应剔除，重新回归分析。

10.根据权利要求1所述的一种对羟基苯丙氨酸含量测定方法，其特征在于：液相质谱所用离子源为ESI(+)，所用的离子对母离子为：182±0.5，子离子为：136±0.5。