[发明专利]一种完整蛋白质组高pH反相色谱高通量预分离方法

权利要求书

1.一种完整蛋白质组高pH反相色谱高通量预分离方法，其特征在于，加入蛋白质混合物于SPE柱，所述蛋白质混合物与SPE柱中的反相色谱填料混合，SPE柱中依次加入不同极性的洗脱液，利用注射器将不同极性的洗脱液排出SPE柱得到溶解了不同蛋白的馏分，离心管接收馏分。

2.根据权利要求1所述完整蛋白质组高pH反相色谱高通量预分离方法，其特征在于，具体包括以下步骤：

(1)将蛋白质混合物加入SPE柱中，使蛋白样品缓慢地经过色谱填料而被吸附，SPE柱的下端用离心管承接流出的液体；

(2)在上述步骤(1)处理后的反相色谱填料中加入8种不同极性的流动相，缓慢推注射器依次洗脱，加入的流动相的极性由小到大，SPE柱的下端用离心管承接流出的馏份；

(3)每个馏份用真空浓缩仪进行浓缩干燥。

3.根据权利要求2所述完整蛋白质组高pH反相色谱高通量预分离方法，其特征在于，所述步骤(2)的流动相的pH大于8。

4.根据权利要求2所述完整蛋白质组高pH反相色谱高通量预分离方法，其特征在于，所述步骤(1)中将SPE柱的下端流出的液体重新加入SPE柱中，重复操作4-6次。

5.根据权利要求2所述完整蛋白质组高pH反相色谱高通量预分离方法，其特征在于，所述注射器的出口通过转接头与SPE柱连接，所述注射器的使用方式：断开SPE柱和转接头之间的联接，注射器向后拉，在SPE柱加入蛋白混合液或洗脱液后，联接SPE柱和转接头，缓慢地推注射器，使SPE柱中的液体流出。

6.根据权利要求2所述完整蛋白质组高pH反相色谱高通量预分离方法，其特征在于，所述不同极性的流动相分别由不同体积的缓冲液A和缓冲液B配制而成，极性由小到大的流动相的乙腈浓度分别为5.0％、20.0％、35％、40％、48％、55％、75％、90％，所述乙腈浓度用体积比表示。

7.根据权利要求6所述完整蛋白质组高pH反相色谱高通量预分离方法，其特征在于，所述的缓冲液A为10mM的甲酸铵水溶液；所述的缓冲液B的组成体积比为90％乙腈和10％10mM的甲酸铵水溶液。

8.根据权利要求1所述完整蛋白质组高pH反相色谱高通量预分离方法，其特征在于，所述SPE柱中放置两片筛板，所述反相色谱填料装在两片筛板中间。

9.根据权利要求1所述完整蛋白质组高pH反相色谱高通量预分离方法，其特征在于，所述反相色谱填料包括C4反相色谱填料。