[发明专利]ADGRG6增强子的突变序列、检测方法、所用的特异性引物对和应用

说明书

本发明ADGRG6增强子的突变序列、检测方法、所用的特异性引物对和应用，属于生物技术领域。所述ADGRG6增强子的突变序列为：ADGRG6增强子chr.6：142,706,206位为G﹥A和chr.6：142,706,209位为C﹥T的突变序列。所述突变序列在体外膀胱癌组织样本中高频发生。在含有突变序列的体外膀胱癌组织样本中ADGRG6高表达并且新生血管密度大；特异性siRNA通过干扰ADGRG6的表达从而抑制了膀胱癌细胞招募血管内皮细胞的能力和膀胱癌细胞诱导血管内皮成小管的能力。本发明的优点：ADGRG6增强子的突变序列及其特异性引物可用来开发膀胱癌早期筛查与辅助诊断的商品化试剂盒。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及ADGRG6增强子的突变序列、检测方法、所用的特异性引物对和应用。

背景技术

膀胱癌是泌尿系统最常见的恶性肿瘤。2004年WHO《泌尿系统及男性生殖器官肿瘤病理学和遗传学》中膀胱癌的病理类型包括膀胱尿路上皮癌、膀胱鳞状细胞癌、膀胱 腺癌，其他罕见的还有膀胱透明细胞癌、膀胱小细胞癌、膀胱类癌。其中最常见的是膀 胱尿路上皮癌，约占膀胱癌患者总数的90％以上，通常所说的膀胱癌就是指膀胱尿路上 皮癌，既往被称为膀胱移行细胞癌。

大约有90％以上的膀胱癌患者最初的临床表现是血尿，通常表现为无痛性、间歇性、 肉眼全程血尿，有时也可为镜下血尿。血尿可能仅出现1次或持续1天至数天，可自行减轻或停止，有时患者服药后与血尿自止的巧合往往给患者“病愈”的错觉。有些患者可 能在相隔若干时间后再次出现血尿。血尿的染色由浅红色至深褐色不等，常为暗红色， 有患者将其描述为洗肉水样、茶水样。出血量与血尿持续时间的长短，与肿瘤的恶性程 度、大小、范围和数目并不一定成正比。有时发生肉眼血尿时，肿瘤已经很大或已属晚 期；有时很小的肿瘤却出现大量血尿。有些患者是在健康体检时由B超检查时发现膀胱 内有肿瘤。有10％的膀胱癌患者可首先出现膀胱刺激症状，表现为尿频、尿急、尿痛和 排尿困难，而患者无明显的肉眼血尿。这多由于肿瘤坏死、溃疡、膀胱内肿瘤较大或数 目较多或膀胱肿瘤弥漫浸润膀胱壁，使膀胱容量减少或并发感染所引起。膀胱三角区及 膀胱颈部的肿瘤可梗阻膀胱出口，而出现排尿困难的症状。

对于40岁以上出现无痛性肉眼血尿，应考虑到泌尿系肿瘤的可能性，特别是膀胱癌。 综合患者既往史、家族史，结合症状和查体做出初步判断，并进一步进行相关检查。检查方法包括尿常规检查、尿脱落细胞学、尿肿瘤标记物、腹部和盆腔B超等检查。根据 上述检查结果决定是否行膀胱镜、静脉尿路造影、盆腔CT或/和盆腔MRI等检查明确诊 断。其中，膀胱镜检查是诊断膀胱癌的最主要方法。

在我国，膀胱癌发病率和死亡率均居泌尿系统肿瘤首位，且近年来其发病呈逐年上 升和年轻化趋势。膀胱癌多数(90％)是膀胱上皮癌，这些膀胱癌被进一步分为浅表 非肌层浸润性膀胱癌(NMIBC)和肌层浸润性膀胱癌(MIBC)。浸润性膀胱癌病人预后 不佳，5年生存率仅为20-40％，其中50％以上的患者会由于发生转移而死亡。降低膀胱 癌转移率成为临床上迫切需要解决的重大问题。肿瘤血管生成是肿瘤原发部位或远端转 移器官形成新生血管的病理过程，是癌症的典型特征，通过向癌细胞提供足够的营养并 帮助肿瘤细胞转移到远端，促进肿瘤生长和进展。因此，靶向肿瘤血管新生是癌症治疗 的有效靶点。膀胱癌是高度血管化的癌症，而其分子基础和涉及的信号传导途径还有待 研究。阐明膀胱癌病理性血管生成与遗传变异之间关联，揭示其作用机理，有利于现有 的抗血管生成药物在膀胱癌治疗中的应用，同时可为膀胱癌抗血管生成治疗提供潜在的 新靶点。

膀胱癌是一种分子异质性疾病，其基因组包含有从核苷酸突变到染色体改变等各种形式的体细胞遗传改变。因此筛选和鉴定出与膀胱癌发生发展及转移密切相关的重要基因，并对其作用的分子机制进行深入研究，寻找到新的调控膀胱癌转移的关键分子，是目前进行预测和干预膀胱癌转移诊治、改善预后的关键，也是早期辅助诊断或特异性靶向治疗的理论基础。

发明内容